b1 原理
黃酮類化合物在亞硝酸鈉及強鹼性條件下，可與三價鋁離子生成紅色絡合物，在波長510nm 附近產生最大吸收。在一定濃度範圍內，其濃度與吸光度符合朗伯－比爾定律。
b2 試劑
除非另有說明，所用試劑均為分析純，水為蒸餾水或去離子水。
b2.1 稀乙醇溶液(50%，v/v)：量取乙醇加水稀釋至50%。
b2.2 亞硝酸鈉溶液（5g/100ml）：稱取5g 亞硝酸鈉於小燒杯中，加水溶解，稀釋並定容至100ml。
b2.3 硝酸鋁溶液（10g/100ml）：稱取10g 硝酸鋁於小燒杯中，加水溶解，稀釋並定容至100ml。
b2.4 氫氧化鈉溶液（4.3g/100ml）：稱取氫氧化鈉43g 於小燒杯中，加水溶解，並稀釋至1000ml。
b2.5 蘆丁標準溶液（0.02g/100ml）：準確稱取經105℃乾燥至恒重的蘆丁20mg，用稀乙醇溶液溶解，並定容至100ml。
b3 儀器
紫外-可見分光光度計。
b4 分析步驟
b4.1 標準曲線的繪製
精密量取蘆丁標準溶液0.0ml、1.0ml、2.
0ml、3.0ml、4.0ml、5.
0ml、6.0ml，分別置於25ml 容量瓶中，各加水至6ml，加亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6min，加硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6min，加氫氧化鈉溶液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15min，同時，按上述步驟不加硝酸鋁溶液配製空白液，作為空白調零，在波長510nm 處測定吸光度，以吸光度為縱座標，濃度為橫座標，繪製標準曲線。
b4.2 試樣的製備
精密量採樣品適量（v），置25ml（v1）容量瓶中，加入稀乙醇溶液定容至刻度。準確吸取該液5ml（v2），置於另乙隻25ml 容量瓶中，加水1ml，加亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6min，加硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6min，加氫氧化鈉溶液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15min，作為測試液。同時，按上述步驟不加硝酸鋁溶液配製空白液，作為空白調零。
b4.3 試樣的測定
吸取測試液，以空白液為對照，在波長510nm 處測定其吸光度，根據標準曲線計算測試液中總黃酮的含量（a）。如果測試液的吸光度超出標準曲線最高濃度的吸光度，則應對測試液進行適當稀釋後再測定。
b4.4 計算公式
樣品中總黃酮的含量（x）按下列公式計算：
式中：x ——樣品中總黃酮含量，單位為毫克每100 毫公升（mg/100ml）；
a ——從標準曲線算得的測試液中總黃酮含量，單位為毫克（mg）；
v ——量採樣品的體積，單位為毫公升（ml）；
v1 ——樣品定容的體積，單位為毫公升（ml）；
v2 ——配製測試液量採樣品溶液的體積，單位為毫公升（ml）。
注：計算結果精確至小數點後一位。
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