做組織RT PCR標本的儲存方法

2022-02-27 01:29:55 字數 1347 閱讀 5754

1.只要取組織是在組織離體30min內完成的、並且立即放入-80或液氮中儲存的就對實驗結果不會有影響。建議取材時將組織置於滅菌的凍存管中儲存在液氮罐,取材前可以設計好每管中存放的組織量,以便後來rna抽提時取用方便。

有條件的話最好先在液氮中速凍,再放到-70℃中儲存.快速冷凍能有效地防止rna的降解.若直接放置於-80度,樣品的冷凍過程還是有點慢.

2.凍存管也最好用depc處理.國產的很多塑料製品都比較髒,管內會有一些含rna酶的東西.一般我們取樣用來包裝樣品的錫紙也要經過高溫烘烤去除rna酶的.

3.rnalater一般用於不方便用液氮凍存的樣品,或在不方便帶液氮罐的情況下使用.但它對儲存的組織大小有一定的要求,要切成比較小的塊狀,進口的rnalater也比較貴.目前有qiagen公司的rneasy protect kits提供一種rnalater rna stabilization reagent,只要在取樣後立即加入這種試劑,即可保護樣品中的rna完整而不被降解。在rnalater中的樣品rna可以在37度下穩定儲存1天,或者在18—25度儲存7天,2—8度穩定4周,或者在-20度永久儲存。這種技術為在不同溫度下取樣,運輸和儲存樣品提供了極大的方便,特別適用於各種動物組織、培養細胞、細菌、白細胞,但必須說明的是它不適用於全血或體液中rna的儲存。

rnalater的用法非常簡單,只要在取樣後立即將樣品完全浸入適量(10ul/1mg組織)的rnalater中即可。取樣的動作要盡量快速利索,組織樣品的大小以不超過0.5公分厚為宜,對於一些小的組織如小鼠的脾、腎等器官則可以整個取出浸入溶液中,較大的則應切開為厚度小於0.

5公分的小塊,以確保rnalater能迅速擴散滲透入組織塊中的所有細胞中。取樣的容器應該足夠大以容納10倍於組織重量的溶液,避免組織塊擠在一起,同時建議將溶液加滿容器以避免在運輸過程中組織塊露出液面。注意本試劑只適用於新鮮樣品,對於冷藏和包埋的樣品請選用rneasy kit。

儲存後的樣品可以直接用於rna或者mrna的抽提。rnalater不會影響組織塊的結構,可以在室溫下切出適量的組織塊用於稱量和抽提rna,剩下的部分可用於繼續儲存樣品。-20度凍存的樣品可以取出在室溫下進行稱量等操作而無需乾冰。

在-20度凍存的樣品反覆凍融20次rna依然保持完好無損。rnalater處理的樣品比新鮮組織稍微硬一點,但對不會影響勻漿過程。

實際上,抽提組織總rna時,如果發生降解,最可能的環節是組織從液氮或-80冰箱內取出後解凍時間過長或使用勻槳器勻漿時操作時間過長,導致組織內細胞破裂釋放rna酶,而rna酶滅活物質異硫氰酸胍又不能及時於之接觸並使其滅活,因而將rna降解。因此,現在我們在抽提總rna時一般是取一定量組織放入碾缽內,邊碾磨邊加入液氮直至成粉末,然後加入到sol d中,這樣很少有降解的。

當然,在抽提過程中depc處理tip及相關裝置和帶口罩、勤換手套防止rna酶汙染也是極為重要的。

水果的儲存方法

熱帶水果最好放在避光 陰涼的地方貯藏。如果一定要放入冰箱,應置於溫度較高的蔬果槽中,儲存的時間最好不要超過兩天。夏季到了,很多應季的熱帶水果陸續登陸京城市場,朝九晚五的上班族們通常都會利用週末的時間把一周所需要的水果買回家,然後一股腦的放進冰箱裡,其實這樣做是很不科學的。有些水果喜涼 有些水果怕涼,...

植物標本的製作方法

1 尋找一株完整的植物,最好同時有根莖葉 花 果實 種子。2 植物體展開不超過a4大小 3 仔細的挖下植物體。4 小心清洗汙泥,去除枯葉。5 將植物攤開在a4的紙上 6 蓋上另外一張a4紙 7 將標本小心移入報紙中。8 將報紙兩處的開口釘上 9 將報紙兩處的開口釘上 10 在乾燥地板上放置十張左右的...

臨床檢驗標本的收集方法

臨床檢驗結果是否可靠,除了檢驗儀器和裝置,以及檢驗人員的業務素質外,主要取決於臨床檢驗的質量控制。臨床檢驗的質量控制包括病人的準備 標本收集 運送 分析前處理 分析過程 結果計算 報告書寫等全過程。這中間,除了過失誤差外,影響檢驗結果的主要是生理學變異及分析變異 即誤差 而正確的收集標 本就是為了排...