中華人民共和國國家標準
消毒與滅菌效果的評價方法與標準 gb15981-1995
evaluating method and standard for the efficacy
of disinfection and sterilization
第一篇壓力蒸汽滅菌效果評價方法與標準
1 主題內容與適用範圍
本方法規定了壓力蒸汽滅菌技術標準及其評價滅菌效果的檢測方法
本方法適用於對壓力蒸汽滅菌裝置滅菌效果的評價。
2 試劑
本標準所用試劑，凡未說明規格者，均為分析純(ar)，水為蒸餾水。
2.1蛋白腖。
2.2葡萄糖。
2.3溴甲酚紫酒精溶液：取溴甲酚紫2.0g，溶於100ml95%乙醇中。
2.4溴甲酚紫蛋白腖水培養基配製：蛋白腖10.
0g，葡萄糖5.0g，溶於1000ml蒸餾水中，調ph值至7.0～7.
2，然後再加2%溴甲酚紫酒精溶液0.6ml，搖勻後，按5ml/管，分裝包口，置壓力蒸汽滅菌器中，於115℃滅菌40min後備用。
3 指示菌
嗜熱脂肪桿菌芽胞(atcc 7953或ssi k31)菌片，含菌量為5×105～5×106cfu/片，121℃下，殺滅90%微生物所需時間d121值為1.3～1.9min，殺滅時間(kt值)為≤19min，存活時間(st值)為≥3.
9min。
4 化學指示劑
需用衛生部批准的化學指示劑。
5 技術要求
6 檢測方法
6.1生物學指標(用作壓力蒸汽滅菌裝置滅菌效果的依據)。
6.1.1將嗜熱脂肪桿菌芽胞菌片兩個分別放入滅菌小紙袋內，置於標準試驗包中心部位。
6.1.2滅菌櫃室內，上、中層**和排氣口處各放置乙個標準試驗包(由3件平紋長袖手術衣，4塊小手術巾，2塊中手術巾，1塊大手術巾，30塊10cm×10cm、8層紗布敷料包裹成25cm×30cm×30cm大小)。
手提壓力蒸汽滅菌器用通氣貯物盒(22cm×13cm×6cm)代替標準試驗包，盒內盛滿中試管，指示菌片放於中心部位兩隻滅菌試管內(試管口用滅菌牛皮紙包封)，將盒平放於手提壓力蒸汽滅菌器底部。
6.1.3經乙個滅菌週期後，在無菌條件下，取出標準試驗包或通氣貯物盒中的指示菌片，投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白腖水培養基中，56℃培養48h，觀察培養基顏色變化。
6.2化學指標
在物品包外用化學指示膠帶，可作為物品是否經過滅菌的處理標誌。在物品包內中心部位用化學指示劑，可作為物品是否滅菌的參考標誌。
7 結果判定及評價
7.1同次檢測中，標準試驗包或通氣貯物盒內，每個指示菌片接種的溴甲酚紫蛋白腖水培養基全部不變色，判定為滅菌合格。指示菌片之一接種的溴甲酚紫蛋白腖水培養基由紫色變為黃色時，判定為滅菌不合格。
7.2化學指示劑的顏色變為與滅菌合格標準色相同時，或熔化時作為滅菌合格的參考標準。
第二篇紫外線表面消毒效果評價方法與標準
8 主題內容與適用範圍
本方法規定了物體表面消毒用紫外線的波長、強度及評價其消毒效果的物理學指標和生物學檢測方法。
本方法適用於紫外線直接照射到的物體表面消毒效果評價。
9 指示菌
9.1大腸桿菌(8099或atcc 25922)。
9.2枯草桿菌黑色變種芽胞(atcc 9372)。
10 物理學指標
10.1在電壓220v時，普通30w直管型紫外線燈，在室溫為20～25℃的使用情況下，253.7nm紫外線輻射強度(垂直1m處)應≥70μw/cm2。
10.2在電壓220v時，高強度紫外線燈，在室溫為20～25c的使用情況下，253.7nm紫外線輻射強度(垂直1m處)應≥200μw/cm2。
10.3照射劑量按式(1)計算：
劑量(μw·s/cm2)＝強度(μw/cm2)×時間(s1)
11 檢測方法
11.1物理學檢測方法
11.1.1燈管的紫外線強度(μw/cm2)用中心波長為253.7nm的紫外線強度測定儀(標定有效期內)，在燈管垂直位置1m處測定。
11.1.2在實際應用中消毒表面的照射強度應以燈管與消毒物件的實際距離測定。
11.1.3表面消毒接受的照射劑量，應達殺滅目標微生物所需。對大腸桿菌，照射劑量應達到20000μw·s/cm2，對枯草桿菌黑色變種芽胞應達到100000μw·s/cm2。
11.2生物學檢測方法
11.2.1採用載體定量消毒試驗。載體製備按本標準附錄c進行。
11.2.2開啟紫外線燈5min後，將8個染菌玻片平放於滅菌器皿中，水平放於適當距離照射，於4個不同間隔時間各取出2個染菌玻片，分別投入2個盛有5ml洗脫液(1%吐溫80，1%蛋白腖生理鹽水)試管中，振打80次。
11.2.3經適當稀釋後，取0.5ml洗脫液，作平板傾注，每個染菌玻片接種兩個，放37℃培養48h作活菌計數。
11.2.4陽性對照，除不作照射處理外，取2個染菌玻片分別投入2個盛有5ml洗脫液中振打80次，餘按4.2.3進行。
11.2.5計算殺滅率
陽性對照**菌數– 試驗組**菌數
殺滅率100······（2）
陽性對照**菌數
12 判定標準
12.1對指示菌殺滅率≥99.9%判為消毒合格。
12.2達物理學檢測標準時，作為消毒合格的參考標準。
第三篇液體消毒劑消毒效果評價方法與標準
13 主題內容與適用範圍
本方法具體規定了消毒劑消毒效果生物學檢測方法及其評價標準。
本方法適用於消毒劑對各種物體的消毒效果評價。
14 理化指標
置20±2℃水浴中，測定在使用濃度下殺滅指示微生物達到消毒或滅菌所需的最短時間(min)。
15 指示微生物
15.1細菌
15.1.1細菌繁殖體：金黃色葡萄球菌(atcc 6538)、大腸桿菌(8099或atcc 25922)。
15.1.2細菌芽胞：枯草桿菌黑色變種芽胞(atcc 9732)。
15.2真菌：白色念珠菌(atcc 10231)。
15.3B型肝炎表面抗原：純化抗原(1.0mg/ml)。
16 檢測方法
16.1中和試驗(見附錄 a)。
16.2消毒劑定性消毒試驗(見附錄 b)。
16.3消毒劑定量消毒試驗(見附錄 c)。
16.4消毒劑殺菌能量試驗(見附錄 d)。
16.5B型肝炎表面抗原(hbsag)抗原性破壞試驗(見附錄 e)。
17 消毒效果評價標準
17.1對細菌和真菌的殺滅率≥99.9%，對hbsag，將檢測方法靈敏度104倍或5×104倍(載體試驗)的hbsag抗原性破壞，可判為消毒合格。
17.2對枯草桿菌黑色變種芽胞全部殺滅，可判為滅菌合格。
17.。
附錄a中和劑中和效果試驗
(補充件)
a1 內容提要
為了準確評價消毒劑對微生物的殺滅作用，消毒試驗中要求選擇適當中和劑。所選中和劑不僅能及時中止消毒劑的殺微生物作用，且中和劑本身及其與消毒劑的反應產物(下稱中和產物)尚需對微生物無抑制或殺滅作用，對培養基無不良影響。
a2培養基和試劑
a2.1營養瓊脂培養基
成分： 蛋白腖10g
牛肉膏3g
氯化鈉5g
瓊脂15g-20g
蒸餾水1000ml
制法：除瓊脂外，其他成分溶解於蒸餾水中，調ph至7.2-7.4，加入瓊脂後加熱溶解，過濾分裝，經121℃、壓力蒸汽作用30min，滅菌後備用。
a2.20.03mol/l磷酸鹽緩衝液(ph7.2～7.6，下稱pbs)。
成分：磷酸氫二鈉 2.84g
磷酸二氫鉀1.36g
蒸餾水1000.00ml
制法：將磷酸氫二鈉與磷酸二氫鉀溶解於蒸餾水中，ph為7.2～7.4，分裝，經121℃、30min壓力蒸汽滅菌後備用。
a3器材
a3.1錐形燒瓶。
a3.2平皿(直徑9cm)。
a3.3量筒。
a3.4精密ph試紙。
a3.5無菌試管。
a3.6無菌刻度吸管(1.0，5.0，10.0ml)。
a3.7恆溫培養箱。
a3.8冰箱。
a3.9菌落計數器。
a3.10酒精燈。
a4中和劑(註明生產廠家，批號)
a5操作方法
a5.1用pbs將指示菌製成5×105～5×106cfu/ml懸液。
a5.2將消毒劑用滅菌蒸餾水配製成3種不同濃度，在不加中和劑的情況下，測知該消毒劑10min抑殺指示菌99.9%以上的最低有效濃度。
a5.3取消毒劑10min抑殺指示菌的最低有效濃度與待選擇中和劑進行試驗，選出中和劑種類並依據等當量中和原則，調整中和劑濃度，選出試驗濃度的消毒劑使用中和劑的濃度。
a5.4中和劑選擇試驗時，先將消毒劑1.0ml與中和劑溶液9.0ml混合，製成中和產物溶液，再按表a1分組進行。
表a1中和劑選擇試驗
然後，傾注平板置37℃培養48h，計數菌落數，按稀釋倍數計算出**菌數（cfu/ml）。
a6中和試驗結果報告方法(如表a2)
表a2中和試驗結果舉例
3、4、5組間誤差率計算公式
消毒滅菌效果檢測方法
一 手和 黏膜消毒效果監測 1 取樣時間 在消毒後立即取樣。2 取樣方法 1 手的取樣 被檢人五指併攏，用浸有含相應中和劑的無菌洗脫液的棉拭子在雙手指屈面從指根到指端往返塗擦 2 次 乙隻手塗擦面積約 30cm2 並隨之轉動取樣棉拭子，剪去操作者手接觸部位，將棉拭子投入 10ml 含相應中和劑的無菌...
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