研究所心得體會

2021-03-09 13:33:08 字數 3342 閱讀 5488

動物醫學對於每個人的第一感覺就是獸醫,這是最為淺顯的,如果沒有接觸這專業,如果沒有去深入了解,也許不懂得這個專業所學的知識,理論在書本中是很難做到統一與體系的,我有幸能夠在學校的研究所實習,在那裡我學到了理論以外的許多東西,這就是實踐的經驗,儘管我們的專業本身就有許多的精品實驗,但是對於我們專業的深入學習仍然是不足的,進入研究所,我一開始以為我可能會一無是處,自己畢竟學的還不夠多,對於血清試驗等等更是一竅不通,後來在老師和學長、學姐的幫助下,我認識了許多儀器,同時也掌握了一些免疫學知識,而且也提前知道了一些病理病徵、藥物使用等等。

每次來研究所要記住的第一件事當然就是遵守研究所的紀律。它是乙個需要安靜與整潔的環境,因此我們在進入研究所不僅要清理好衛生還要保持它的清潔,以及實驗安靜的環境,這樣會給實驗工作者製造良好的工作環境。

在研究所裡接觸最多的是血清試驗,我們要面對許多豬場老闆那裡接來的血,要將血進行入庫登記,然後進行分離血清,要保證每乙份的血清編碼一致,這要認真小心。在離血時我們要學會離心機的基本操作,對於轉速的設定、時間的設定以及按照要求對溫度進行設定,這些設定一般都在轉速6000轉,時間4分鐘溫度至室溫,我們將血清分離出來後,要進行記錄,記錄後放入四攝氏度冰箱待測。每次所接的客戶都要進行客戶豬場情況的登記,豬瘟、藍耳、偽狂犬的免疫情況,所用的廠家藥物等等,還有就是所要求的檢測專案,將資料填寫齊全後,就要進行血清檢測,檢測的血清要使用同一批次的試劑盒,檢測要熟悉檢測流程,以下就是豬瘟、藍耳、偽狂犬的檢測原理及流程。

豬瘟:原理:豬瘟(classical swine fever, csf)是由豬瘟病毒引起的豬急性接觸性傳染病。本病特徵為發病急、高熱稽留和細小血管壁變性引發的廣泛性點狀出血、梗死和壞死。

本病傳染性強,死亡率高。檢測特異性豬瘟抗體可作為豬瘟疫苗的免疫監測及該病輔助檢測指標。

本試劑盒採用elisa方法檢測豬血清中的特異性豬瘟抗體。本試劑靈敏度高,特異性強,重複性好,操作方便快速,可分多次使用。

操作流程:1. 洗滌液配製用蒸餾水或去離子水將濃縮洗滌液(2號液)按1:10稀釋,如取50ml濃縮液與450ml蒸餾水或去離子水充分混勻即為工作洗滌液。

2.樣本稀釋用樣本稀釋液(5號液)將待檢血清樣本按1:40稀釋,如取5ul樣本與195ul樣本稀釋液,混勻。陰性、陽性對照品不用稀釋,直接加樣。

3.加樣反應每次試驗設陰性對照2孔、陽性及空白對照各1孔(分別加入陰性、陽性對照及樣本稀釋液100ul)。樣本檢測孔每孔加已稀釋血清樣本100ul。37℃避光反應30分鐘後,甩去孔內液體,每孔注滿工作洗滌液洗滌3次,每次均需停留1分鐘後再甩淨,拍乾。

4.加酶反應除空白對照孔外,每孔加酶結合物(1號液) 1滴。37℃避光反應30分鐘後,甩去孔內液體,如上洗滌,拍乾。

5.顯色反應加底物液(3號液)和顯色劑(4號液)各1滴,混勻,37℃避光顯色10分鐘。加終止液(6號液)1滴,終止反應(加終止液後,藍色會變為黃色)並判讀結果。

結果判斷:陰性對照呈無色或淺黃色,陽性對照呈明顯黃色,表示試驗有效。以空白對照調零,用酶標儀於450nm(630nm作參比波長)讀取吸光度(a值)。

待檢孔a值大於陰性對照a值平均值的2.1倍者判為陽性。如陰性對照a值的平均值低於0.

08時按0.08計算。

藍耳:原理:本試劑盒是採用純化的豬藍耳病抗原包被微孔板,在試驗中,加入稀釋的待檢血清,經溫育後,若樣品中含有豬藍耳病特異性抗體,則將與微孔板上的抗原結合,經洗滌除去未結合的抗體和其它成分後,再加入酶標二抗,與微孔板上的抗原抗體複合物發生特異性結合,再經洗滌除去未結合的酶結合物,在孔中加入底物液,與酶結合物,反應形成藍色產物,顏色強弱與標本中抗體濃度成正比, 加入終止液後用酶標儀630nm 波長測定各反應孔中的od值。

從而達到快速檢測之目的。

操作流程:1. 從室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條,剩餘板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設定標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μl;

3. 待測樣本孔先加待測樣本10μl,再加樣本稀釋液40μl;

4. 隨後標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(hrp)標記的檢測抗體100μl,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恆溫箱溫育60min。

5. 棄去液體,吸水紙上拍幹,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍幹,如此重複洗板5次(也可用洗板機洗板)。

6. 每孔加入底物a、b各50μl,37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μl,15min內,在450nm波長處測定各孔的od值。

偽狂犬:

原理:1. 樣本稀釋:用樣本稀釋液(5號液)將待檢血清按1:100稀釋,如取5ul血清與500ul樣本稀釋液,充分混勻;陰、陽對照不用稀釋,直接加樣。

2. 加樣反應:取出所需反應板條,樣本檢測孔每孔分別加已稀釋樣本血清100ul。

同時設陰性、陽性及空白對照各1孔,取陰性、陽性對照各100ul分別加入反應孔內,空白對照孔僅加入100ul樣本稀釋液(5號液)。37℃避光反應30分鐘後甩去孔內液體,每孔加洗滌液(2號液)1滴,立即用蒸餾水注滿,靜置30秒後甩去,再直接用蒸餾水洗滌四次,每次均靜置30秒後甩去,最後一次甩去拍幹。

3 .加酶反應:除空白對照孔外其餘每孔加酶結合物(1號液)2滴,37℃避光反應30分鐘後甩去孔內液體,如上洗滌,拍乾。

4. 顯色反應:加底物(3號液)和顯色劑(4號液)各1滴,混勻,37℃下避光顯色10分鐘。加終止液(6號液)1

滴,混勻,終止反應(加終止液後藍色會變為黃色)。

結果判斷

儀器判斷:以空白對照調零用酶標儀於450nm(620nm作參比波長)讀取o.d值,待檢孔o.

d值大於陰性對2.1倍者為陽性。當陰性對照o.

d值低於0.07時按0.07計算。

以上檢測是elisa實驗要通過酶標儀讀取od值,通過電腦統計整理出統計結果,最後製成檢測報告,

在研究所還會遇上客戶送病家畜過來檢查,我們要進行解剖,對家畜的肺、肝、氣管等進行使用血平板或巧克力板進行接菌培養,有時還要對豬的血液進行附紅體鏡檢,有些時候要做腸道腹瀉的藥敏試驗,同時有時候還要採豬腦製成懸濁液進行兔子偽狂犬的攻毒試驗。第二天進行對於所接菌的鏡檢,進行革蘭氏染色粗判斷陰性還是陽性,如果疑是巴士桿菌還要進行瑞士染色,是否有明顯的兩極著色現象。同時根據菌落的形態特徵初步判斷是什麼菌,將疑是的菌寫入報告作為致病源的參考。

我們每週可能還要進行培養基的製備,有普通培養基、血平板、巧克力板等培養基的製備。對於製備此培養基要做好事前的滅菌事項。還要採集兔鮮血,在兔子的兩肩胛骨往下感覺心跳最快的兩肋間垂直緩慢入針,吸取相應的血液。

把握好溫度製成普通板、血平板、巧克力板,它們的溫度要求普通板無關緊要,血平板要在瓊脂溫度達四五十度是加入兔鮮血,倒板製成血平板,將加有血的瓊脂在八十攝氏度下加熱30分鐘就可倒板製成巧克力板。

通過在研究所的實習中我學到了許多的知識,遠遠不僅上述所說的,其實有很多學習的方法在研究所都有養成,對於日後的學習生活有很大的幫助。它讓我豐富了我的課餘生活,同時讓我更加熱愛上了我的專業,我也明確了自己對於自己未來的道路。我很高興能有這麼個平台讓自己成長起來。

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