如何進行石蠟切片製作

2021-03-04 01:30:04 字數 1112 閱讀 3681

一、 固定液(波恩氏液)

飽和苦味酸75ml+40%甲醛25ml+冰醋酸5ml

二、 蘇木精染液(實驗前至少3個月要配好)[harris』 solution]

1. a液: kal(so4)2(硫酸鋁鉀)40g+蒸餾水900ml,加熱溶解

2. b液蘇木精5g+無水乙醇100ml

3. 將b液倒入a,繼續加熱至沸騰

4. c液,1.5g氧化汞溶於10ml蒸餾水

5. 將c倒入ab混合液,邊加邊攪拌,緩慢,加完後加熱至再度沸騰

6. 將上混合液放入冷水中迅速冷卻

7. 裝瓶,臨用前加入10ml冰乙酸

使用之前要過濾!

三、 熬蠟

3-4天,每天6-7 h,至金黃為止。

四、 脫水

如果用的是波恩氏液,則可以從50%或者70%乙醇開始脫水。如果當天不能完成透明過程,到70%處可以停止,否則得一直做到透明過程。如果用的是甲醛-pbs緩衝液固定,則必須從30%處脫水。

30%(乙醇)1 h--------50% 1h--------70% 1 h(可以過夜85% 1 h95% i 30min------95% ii 30min-------100% i,ii 100%處時間須自己摸索,不同組織脫水時間不一樣。如果脫水時間過長,則會導致切片的時候有刀痕並且組織不容易切完整。如果脫水時間過短,細胞間隙水分不能完全脫去,透明的時候會變得渾濁,導致透明液不能完全代替乙醇。

一般說來,像腎臟、胰腺等管狀、泡狀結構比較多的組織脫水時間可稍微減短,像心臟、肝臟等結構比較緻密的組織,脫水時間可稍微長點,一般兩次100%乙醇處,每次都不超過30min。

五、 透明

(1) 1/2二甲苯+1/2乙醇 30min

(2) 二甲苯i 30 min

(3) 二甲苯ii 30min。如果用二甲苯透明,則須完成後續的包埋工作。如果二甲苯裡是渾濁狀態的,表明組織間隙水沒脫乾淨。

也可以用水楊酸甲酯透明,一般要18-24 h。

六、 包埋

(1) 1/2二甲苯+1/2 石蠟 20~30 min

(2) 石蠟i 20~30 min

(3) 石蠟ii 30 min

七、 切片

一般4-7°角,4-5微公尺厚度

八、 染色(最後再做)

石蠟切片製作流程

一.取材 1,樣品要求 長,寬各1cm左右,厚不超過5mm 2,固定液 10 固定液或4 多聚甲醛 組織塊 20 1為宜 3,固定時間 依大小而定,一般3 5h即可,如24h或更長,應密封瓶口,封前換液 4,修塊 二.脫水 1,水洗 將固定組織塊放入廣口瓶,瓶口用紗布包好,置流水下水洗,水洗時間依固...

石蠟切片製作過程

一 材料與用具 1 材料 魚 性腺 腸 肝胰臟等。2 用具 溶蠟箱 蠟杯 不同熔點的石蠟 酒精燈等。二 實驗內容與步驟 1 取材及固定 取動物體上的小塊組織成為組織塊。組織塊的大小以不超過0.5立方厘公尺為宜。切去組織塊時動作要輕,切忌用力牽引或挾持,以免組織內部發生變化。組織塊取下後,先用先用0....

石蠟切片的製作方法

石蠟切片 1 儀器 石蠟切片機 烘箱 顯微鏡 染色缸 小培養皿 鑷子 毛筆 吸水紙 紗布 載玻片 蓋玻片等。2 試劑 faa固定液 70 酒精90ml 冰醋酸5ml 5ml 10 番紅水溶液 0.5 固綠 用95 的酒精配製 酒精 100 95 80 70 50 二甲苯 蒸餾水 甘油 中性樹膠等。3...