石蠟切片製作流程

2021-03-04 01:30:04 字數 1694 閱讀 3778

一. 取材

1, 樣品要求:長,寬各1cm左右,厚不超過5mm

2, 固定液:10%****固定液或4%多聚甲醛:組織塊=20:1為宜

3, 固定時間:依大小而定,一般3-5h即可,如24h或更長,應密封瓶口,封前換液

4, 修塊

二.脫水

1, 水洗:將固定組織塊放入廣口瓶,瓶口用紗布包好,置流水下水洗,水洗時間依固定時間而定,一般12h以上,固定時間越長水洗時間越長。

2, 脫水

1)75%酒精1h

2) 80%酒精1h

3)95%酒精1h

4) 95%酒精1h

5) 100%酒精1h

6) 100%酒精1h

組織塊在進入下一階段梯度酒精前要用吸水紙吸乾水,尤其在95%酒精(ⅱ)中進入100%酒精(ⅰ)中,切記防止帶入水分,所有過程要在瓶口加蓋,防止水分進入。

三.透明

1)酒精(100%):二甲苯=1:1 10min

2)二甲苯透明 10min

3二甲苯10min

四.浸蠟

1)二甲苯:石蠟=1:1 30min 溫箱56—58℃

2)石蠟1h溫箱56—58℃

3) 石蠟1h溫箱56—58℃

4) 石蠟1h溫箱56—58℃

溫度保持在56—58℃,溫度太高會燒壞組織塊,太低石蠟會凝固。

五.包埋

首先在金屬框架上塗抹凡士林,以保證石蠟到入後不會外溢。將包埋用石蠟及浸蠟組織塊放在有石棉網的電爐上保溫。在框架中先倒入少許包埋用石蠟,再用鑷子將組織塊迅速移入框架,再倒入石蠟,待完全凝固後取出待用。

六.切片和烘片(烘片溫度38℃)

七.附貼 (45℃);烤片

(一) 附貼 (45℃)

附貼液的配製:新鮮蛋白20ml,麝香草酚少許,用玻璃棒混勻,再加入甘油20ml,繼續混勻。若有多聚懶氨酸處理的切片則直接用之。

(二) 烤片:溫箱內的溫度應保持在40-45℃之間,烤片時間至少1小時。

八.h.e染色

(一)脫蠟

1 二甲苯 ⅰ (脫蠟) 10min

2 二甲苯 ⅱ (脫蠟) 10min

3 100%酒精ⅰ (脫二甲苯) 10min

4 100%酒精ⅱ (脫二甲苯) 10min

5 95%酒精 ⅰ (脫二甲苯) 5 min

6 95%酒精 ⅱ (脫二甲苯) 5 min

7 80%酒精 (脫二甲苯) 5 min

8 自來水或蒸餾水洗(去酒精)5 min

(二)染色

1 蘇木素染液 6 min

2 沖洗清水(蘭化)15 min

3 酸水分化視情況而定 10-20s

4 沖洗淡藍色即可 20 min

5 伊紅染液視情況而定 6 min

(三)脫水,透明

13 80%酒精顏色淡化

14 95%酒精 ⅰ 5min

15 95%酒精 ⅱ 5 min

16 100%酒精ⅰ 5min

17 100%酒精ⅱ 10min

18 二甲苯 ⅰ (透明) 5min

19 二甲苯 ⅱ (透明) 10 min

九.封片:用中性樹膠將切片標本封固。

石蠟切片製作過程

一 材料與用具 1 材料 魚 性腺 腸 肝胰臟等。2 用具 溶蠟箱 蠟杯 不同熔點的石蠟 酒精燈等。二 實驗內容與步驟 1 取材及固定 取動物體上的小塊組織成為組織塊。組織塊的大小以不超過0.5立方厘公尺為宜。切去組織塊時動作要輕,切忌用力牽引或挾持,以免組織內部發生變化。組織塊取下後,先用先用0....

石蠟切片的製作方法

石蠟切片 1 儀器 石蠟切片機 烘箱 顯微鏡 染色缸 小培養皿 鑷子 毛筆 吸水紙 紗布 載玻片 蓋玻片等。2 試劑 faa固定液 70 酒精90ml 冰醋酸5ml 5ml 10 番紅水溶液 0.5 固綠 用95 的酒精配製 酒精 100 95 80 70 50 二甲苯 蒸餾水 甘油 中性樹膠等。3...

如何進行石蠟切片製作

一 固定液 波恩氏液 飽和苦味酸75ml 40 甲醛25ml 冰醋酸5ml 二 蘇木精染液 實驗前至少3個月要配好 harris solution 1.a液 kal so4 2 硫酸鋁鉀 40g 蒸餾水900ml,加熱溶解 2.b液蘇木精5g 無水乙醇100ml 3.將b液倒入a,繼續加熱至沸騰 4...