超薄切片製作過程 1

2022-06-02 03:36:04 字數 943 閱讀 3460

取小鼠肺組織用ph7.4的pbs緩衝液與2%戊二醛配製的固定液浸泡,後用1%的餓酸固定,用pbs緩衝液漂洗,酒精加丙酮脫水,環氧樹脂812浸透、包埋,超薄切片,以下是超薄切片製作過程,供你參考

1. 取材組織的體積要小,將組織修成lmm×lmm×2mm大小。

2. 前固定組織浸入2%~5%戊二醛,在4℃下2小時以上。

3. 用緩衝液洗10-30分鐘×3,以去前固定液,4. 後固定用1%四氧鋨化固定1-2小時在4℃環境中,5.

用緩衝液洗10-30分鐘×3,以去後固定液,6.組織塊脫水步驟為:

50%乙醇10~15min

70%乙醇10~15min

80%乙醇10~15min

90%乙醇10~15min

l00%乙醇+丙酮(等量混合) 10~15min丙酮10~15min

7. 浸透丙酮1份十包埋劑1份常溫3~6小時8. 包埋 37℃ 24小時

9 固化 60℃ 24~48小時

10 切片 50~70nm

11 染色醋酸鈾染色法

用50%~70%乙醇配製醋酸雙氧鈾飽和溶液,染色15~30min,蒸餾水洗。

鉛染色法:

(1).檸檬酸鉛染色液,配製方法如下:

硝酸鉛1.33g

檸檬酸鈉1.76g

雙蒸水30ml

in氫氧化鈉 8ml

染色時間為15~30min。蒸餾水洗,烤乾。

(2).配製epon812包埋劑的方法如下(luft,1961):

a液:epon81262ml

ddsa100ml

b液:epon812100ml

mna89ml

a液多則軟,b液多則硬,a液與b液的比例可根據氣候不同而變化。通常冬天使用a∶b=2∶8,夏天使用a∶b=1∶9左右。配好混合液後,以1.

5%~2%的體積比,逐滴加入dmp-30,並充分攪拌。

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