實驗一光合細菌的分離與純化
一、目的要求
（一）學習掌握從高濃度有機廢水或汙泥中取樣富集培養、分離、純化紅螺菌科細菌。
（二）了解培養兼性光能異養型細菌的培養基和培養方法。
二、實驗材料
菌源：高濃度有機廢水汙染的汙泥
培養基：紅螺菌科細菌分離和增殖培養基
儀器：高壓滅菌鍋，電子天平，電爐，白熾燈，水樣瓶，培養皿等接種分離器具
三、實驗步驟
（一）取樣
從河底、湖底的汙泥以及水田、溝渠、汙水塘等經常有含有機殘渣的汙水進入的地方的泥土中用采泥器或燒杯進行取樣。
配製培養基
（二）紅螺菌科細菌分離培養：
nh4cl 0.1g，mgcl2 0.02g，蒸餾水90ml，0.
1mpa滅菌20min，滅菌後再加入酵母膏0.01g，k2hpo4 0.05g，5ml 5% nahco3和na2s·9h2o，5ml 4% 丙氯酸，nacl 0.
2g，調ph=7.0，瓊脂2g。
富集培養基（生產培養基）：
k2hpo4 0.78g cacl2·h2o 0.05g kh2po4 0.5g
(nh4)2so4 0.05g mgso4·7h2o 0.2g ch3coona 1.65g
nacl 0.5g 硼酸鈉 0.38g 鉬酸銨 0.22g
酵母膏 0.1g 水 1000ml ph 6.7
高溫煮沸即可。
（三）富集培養
將採回的樣品裝入水樣瓶，再倒入配製好的培養液，充分攪拌，為造成厭氧環境，在水樣瓶中加入液體石蠟以隔絕空氣。
（四）分離純化接種
以接種分離法或塗佈分離法對生產用的光合細菌液在平板上進行分離，放置暗處2~3h。
（五）厭氧光照培養
溫度：以28~36℃為最適生長溫度
光照強度：以3000~4000勒克斯（lx）為最佳，即白熾燈至少40瓦，時間5~7天。
四、結果分析
實驗二光合細菌擴大性培養
一、實驗目的
（一）掌握光合細菌擴大培養的方法，分離純化特徵性明顯的菌落
（二）在不染色的情況下，通過顯微鏡觀察光合細菌的形態特徵
二、實驗材料
（一）菌源：上次實驗培養所得紅色和綠色菌液
（二）培養基：紅螺菌科細菌分離培養基和富集培養基
（三）儀器：無菌培養皿，移液管，塑料瓶，顯微鏡等
三、實驗步驟
（一）顯微鏡觀察
1.取清潔的載玻片和蓋玻片；
2.用無菌滴管自光合細菌生長良好的容量瓶內壁處，分別吸取紅色菌液和綠色菌液各一滴，蓋上蓋玻片後，先用低倍鏡找到菌落，再轉換為告別高倍鏡進行觀察。
（二）分離純化
用無菌滴管再次吸取紅色和綠色菌液各數滴，在無菌培養皿中稀釋，然後用接種環進行平板劃線分離，進一步光照厭氧培養。
（三）擴大性培養
1.對照組擴大性培養：將商品光合細菌與生產培養基按1：2的比例進行混合，光照下厭氧條件培養，每班2塑料瓶即可。
2.實驗組擴大性培養：將兩個小組的紅色和綠色菌液分別吸取之後，再將它們分別裝入2個塑料瓶內，乙個盛紅色菌液，乙個盛綠色菌液，最後按1：
2的比例加入配製好的生產性培養基後，繼續培養觀察。
四、培養觀察
（一）培養條件的監測及攪拌；
（二）生產情況的觀察與檢察；
（三）問題的分析和處理。
實驗三輪蟲的分離培養
一、實驗目的
1.了解淡水臂尾輪蟲的生態習性和形態特徵
2.掌握臂尾輪蟲培養的基本方法
二、實驗器材
浮游生物網，樣本瓶，顯微鏡，微吸管，凹玻片，錐形瓶，篩絹，光合細菌，酵母，蒸餾水等
三、實驗步驟
1.取樣的分離
用浮游生物網在自然水體中撈取一些輪蟲，置瓶中帶回室內，如發現臂尾輪蟲（主要為萼花臂尾輪蟲），在解剖鏡下，用微吸管把輪蟲吸出。為了避免吸取其他動物，可先吸於一清潔的凹玻片上，經觀察後再吸入小三角瓶中培養。
2.培養
培養用水需篩絹過濾，除去敵害生物，再進行嚴格消毒。前期培養用水量較少，採用高溫煮沸法。
3.接種
輪蟲的接種密度一般以2~5個/ml為宜，在適宜的溫度、餌料、溶氧、光照等條件下，經8~10天即可擴大培養或收穫。
4.日常管理
投餌：定時投喂單細胞藻類或酵母，也可投喂光合細菌；
攪拌和充氣：每次投喂單細胞藻類後需輕輕的攪拌，一方面可使餌料分布均勻，另一方面可增加水中的氧；
生長情況的檢查：輪蟲生產情況的好壞和繁殖速度的快慢的反映在每次投喂前進行觀察，注意輪蟲的游動是否活潑正常，分布是否均勻，密度是否一天天加大，剩餘餌料量的多少等。
四、實驗結果與討論
實驗四單細胞藻的培養
一、實驗目的
（一）了解單細胞藻培養的種類及生物學特徵
（二）學習並掌握單細胞藻的分離培養方法及注意事項
二、實驗儀器
浮游生物網，錐形瓶，顯微鏡，電爐，培養皿，電子天平，噴壺，燒杯，滅菌鍋等
三、實驗步驟
（一）取樣：分離藻種，首先要採集生長有需要分離的藻類水樣，可用浮游生物網在水中撈取。
（二）鏡檢：水樣採回來後，進行顯微鏡觀察，如果發現需要分離的藻種，而這種藻類在水中數量較多時可立即進行分離。
（三）分離方法
1.顯微鏡吸管分離法：將稀釋的水樣置淺凹載玻片上，在顯微鏡下觀察，挑選要分離的藻胞。
2.水滴分離法：用微量吸管吸取水樣，滴到載玻片上，一載玻片上3~4滴，顯微鏡觀察。如果某一滴內只有乙個需要分離的藻類細胞，無其他生物混雜，可將水滴衝入培養液中培養。
3.平板分離法（噴霧法）：首先用經煮沸消毒的自來水把水樣稀釋到合適的程度，裝入塑料噴霧器中，開啟培養皿蓋，把水樣噴射到培養基表面上，使水樣在培養皿上形成均勻的一薄層水珠。
4.劃線法：水樣不用稀釋，直接用接種環進行劃線培養。
（四）培養
噴射或劃線接種後，蓋上培養皿蓋子，放在適宜的光照條件下培養，一般經過20天左右的培養，就可以在培養基面上生長出相互隔離的藻類群落。通過鏡檢，尋找需要分離的藻類群落，獲得單種培養後，一方面擴大培養，**試驗和生產時用，另一方面可把藻種作較長時間保藏。
四、實驗結果與討論
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