蛋白質工程習題

分子報告:報告分子是一類易於檢測的蛋白質，將其與目的基因融合，通過它的表達產物來標定目的基因的表達調控，分子報告即是這樣的一種標定檢測技術。該技術具有高靈敏度、檢測方便且適合大規模檢測的優點。

具有以下特點：

1、報告分子應不存在於宿主中或易於和內源性基因相區別；

2、應該有乙個簡單、快速、靈敏及經濟的分析方法來檢測報告分子；

3、報告分子的分析結果應該具有很寬的線性範圍，以便於分析啟動子活性的幅度變化；

4、報告基因的表達必須不改變受體細胞或生物的生理活動。

核酶：核酶(ribosome)指的是具有催化活性的rna, 即化學本質是核糖核酸(rna), 卻具有酶的催化功能。核酶的作用底物可以是不同的分子, 有些作用底物就是同一rna分子中的某些部位。

核酶的功能很多,有的能夠切割rna, 有的能夠切割dna, 有些還具有rna 連線酶、磷酸酶等活性。與蛋白質酶相比，核酶的催化效率較低，是一種較為原始的催化酶。此外，一些單鏈dna同樣具有生物酶活性，目前只能人工合成。

rna核酶主要有以下幾種：ⅰ型內含子、ⅱ型內含子、rnasep的rna亞基、髮夾狀核酶、鎚頭狀核酶、肝炎δ病毒核酶、vs核酶。

3、什麼是固定化酶，固定化酶的特點？

1固定化酶的定義

固定化酶是指固定在一定載體上並在一定的空間範圍內進行催化反應的酶。固定化酶既保持了酶的催化特性，又克服了游離酶的不足之處，具有增加穩定性，可反覆或連續使用以及易於和反應產物分開等顯著優點。

2 固定化酶的特點

(1)穩定性:固定化酶的穩定性一般比游離酶的穩定性好。

(2)最適溫度: 固定化酶的最適作用溫度一般與游離酶差不多，活化能也變化不大。

(3)最適ph值: 酶經過固定化後，其作用的最適ph值往往會發生一些變化。

影響固定化酶最適ph值的因素主要有兩個，乙個是載體的帶電性質，另乙個是酶催化反應產物的性質。

(4)底物特異性: 固定化酶的底物特異性與游離酶比較可能有些不同，其變化與底物分子量的大小有一定關係。對於那些作用於低分子底物的酶，固定化前後的底物特異性沒有明顯變化。

固定化酶底物特異性的改變，是由於載體的空間位阻作用引起的。

什麼是基因融合技術？基因融合技術的特點?

概念：將不同的基因或者基因片段序列構成乙個新的雜合基因，經合適的表達系統表達後，獲得由不同功能蛋白拼合在一起的新型多功能蛋白的技術。手段是將第乙個蛋白基因的終止密碼子刪除，接上帶有終止密碼子的第二個蛋白或者多肽基因，實現兩個基因的融合表達。

特點：1、通過與一特異性蛋白質或者其特異的結構域形成融合入蛋白，可使表達產物得到有效的**和純化；

2、通過與不同功能的蛋白質融合，產生新的多功能的蛋白；

3、與報告分子的融合蛋白結合，應用於蛋白定位和轉基因動物；

4、避免目的產物被快速降解，穩定表達產物的產率；

5、改變目的蛋白在胞內的溶解性，防止包涵體的產生；

6、將表達的外源蛋白定向地定位在宿主的不同區域；

7、通過想形成融合蛋白，再切去融合部分，能可靠可重複的獲得蛋白質；

8、是基因改造的手段，應用於蛋白質結構功能的研究。

二、什麼是親和層析？如何根據目的產物選擇洗脫方式？

親和層析是利用蛋白質和配體專一性識別並結合的特性而分離蛋白質的一種層析方法。

洗脫抗原上的抗體時，採用游離的抗原進行洗脫，也可降低ph來洗脫（2.8），酶和其底物，抑制劑和啟用劑，醣蛋白和糖鏈，dna結合蛋白和dna，膜受體蛋白和激素，帶有標籤的基因融合蛋白和該標籤的特異性結合物（如組氨酸標籤和鎳離子）。