檔案編號：abcd-3-sf-01~61
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生效日期：2023年8月8日
abcd醫院檢驗科
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血清總膽紅素(t-bil)測定
1. 實驗原理
血清中的膽紅素分為直接（結合）膽紅素和間接（未結合）膽紅素。大多數方法是在2023年ehrlich提出的重氮法膽紅素測量法1，一些改良的方法已被用來增進反應。這些改良的方法是使直接膽紅素直接和重氮化合物進行反應，生成一種有顏色的化合物，而間接膽紅素需要一種溶劑，如表面活性劑後才能進行反應。
申能總膽紅素試劑是改良的重氮法。使用一種穩定的重氮鹽，2,4-二氯苯胺重氮鹽（dca），與膽紅素反應，形成紅色偶氮化合物，它在540nm吸光度最大。在540/600nm時的吸光度與標本中總膽紅素的濃度成正比。
膽紅素+dca紅色偶氮化合物
表面活性劑
2. 標本：
2.1 病人準備：無特殊要求。最好用禁食的標本以減少乳糜血的干擾。
2.2 型別：血清、肝素或edta血漿，應避光儲存。
3. 標本存放：15～25℃儲存可穩定2天；2～8℃儲存可穩定7天；-20℃儲存可穩定3個月，如冰凍儲存，不可反覆凍融！。
4. 標本運輸：常溫條件下避光儲存運輸。
5. 標本拒收標準：標本溶血、細菌汙染、脂血、非避光儲存運輸的標本。
6. 實驗材料
6.1 試劑：申能總膽紅素試劑盒（141 0817170 1 試劑1＋試劑2）
6.1.1 試劑組成
試劑1：6×64 ml
磷酸緩衝液40mmol/l
氯化鈉9g/l
表面活性劑,穩定劑適量
試劑2：6×16 ml
2,4-二氯苯胺重氮鹽1mmol/l
鹽酸30mmol/l
表面活性劑適量
6.1.2 試劑準備：試劑為即用式。
6.1.3 試劑穩定性與貯存
試劑避光儲存於2～8℃，若無汙染，可穩定至失效期。試劑有效期為18個月。試劑2必需避光儲存。試劑不可冰凍。
6.1.4 變質指示：當試劑有濁度時，表明有細菌汙染，不能繼續使用。
6.1.5 注意事項：
此試劑為體外診斷用，不要入口，毒性還末確定；警告！腐蝕劑！不要入口；避免和眼睛，**或衣服接觸，如果接觸到，立即用大量的水沖洗受損害的部位15分鐘，接觸到眼睛或吞服，立即尋找醫療保護。
6.2 校準品：使用diasys公司提供的trucal u校準品對自動分析儀進行校準，參見生化檢驗校準品和質控品.sop檔案
6.3 質控品：參見生化檢驗校準品和質控品.sop檔案
7. 儀器：奧林巴斯au1000生化分析儀
8. 操作步驟
8.1 專案基本引數：參見生化檢驗奧林巴斯au1000生化分析儀專案測定引數.sop檔案。
8.2儀器操作步驟：參見生化檢驗奧林巴斯au1000生化分析儀操作規程.sop檔案。
9. 檢驗結果的判斷與分析
10. 質量控制：在每一批標本中都應把非定值血清水平i與ii質控做為未知標本進行分析，以2s為質控警告限，3s為失控限，繪製質控圖，判斷是否在控。
質控規則參見生化室室內質控操作規程.sop檔案。
11. 計算方法：以trucal u復合校準品校準儀器後，在病人結果可報告範圍內，儀器直接報告可靠的檢測結果無需手工計算，以μmol/l報告。手工測定計算方法為：
au總膽紅素(μmol/l校準液濃度
as12. 參考值範圍：
嬰兒： 出生24小時內150μmol/l
出生第2天22-193μmol/l
出生第3天12-217μmol/l
出生第4～6天 1.7-216μmol/l
兒童： ＞乙個月3.4-17μmol/l
成年人1.7-21μmol/l
參考值因性別、年齡、飲食和地域的不同而有所差別。根據好的實驗室經驗，每個實驗室應建立自己的參考值。
13. 臨床意義：膽紅素是血紅蛋白的降解產物。
游離膽紅素非極性很強，幾乎不溶解於水。在血液中與白蛋白形成複合物由脾臟向肝臟運輸。在肝臟中，膽紅素與葡萄糖醛酸結合,生成可溶性膽紅素葡萄糖醛酸酯由膽管排入腸道。
溶血（肝前黃疸）、實質的肝損傷（肝性黃疸）和膽管堵塞（肝後黃疸）都會導致血液膽紅素增高，形成高膽紅素血症。人群中常見先天性慢性高膽紅素血症，稱為gilbert綜合症。由於膽紅素降解酶的功能滯後以及出生後紅細胞破碎增多，使60～70%的嬰兒血液出現總膽紅素增高。
常用的膽紅素檢測方法能檢測總膽紅素和直接膽紅素。直接膽紅素的測定主要檢測水溶性的結合膽紅素，因此可以根據總膽紅素和直接膽紅素的差來估計游離膽紅素的含量。
14. 操作效能
14.1 線性範圍：1.2～513μmol/l
14.2 精密度：精密度的評估是根據nccls推薦的標準方法5，au1000批內精密度小於3%或sd≤0.
07，總精密度小於5%或sd≤0.10。用於分析的質控血清和資料處理符合以上的nccls的規則。
14.3 方法學比較：本公司的試劑盒(y)與某商品化試劑盒(x)，同時對247個樣品進行t-bil檢測，將檢測結果作方法學比較，其統計結果如下：
y=1.00x-0.00mol/l；r=1.
000。
14.4 靈敏度：本試劑的檢測限為1.2μmol/l。
14.5 病人結果可報告範圍：1.2～513μmol/l
15. 超出範圍結果處理：本法線性上限為513μmol/l。如樣品測定值超過上限時，應將樣品用0.9％氯化鈉溶液作1:1稀釋，重新測定，結果乘以2。
16. 病危報警值的處理當新生兒血清標本測定結果總膽紅素〉340μmol/l時，在經過複查等確認手段處理後應及時向臨床主管醫生匯報。
17. 方法侷限性
17.1 本法線性上限為513μmol/l。如樣品測定值超過上限時，應將樣品用0.9％氯化鈉溶液作1:1稀釋，重新測定，結果乘以2。
17.2 干擾物質：當樣品中抗壞血酸濃度≤1704μmol/l，血紅蛋白濃度≤5.00g/l，甘油三酯濃度≤22.6mmol/l時沒有觀察到干擾。
18. 補救措施：當儀器發生故障時，迅速聯絡儀器廠家進行維修。
19. 參考文獻
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2. tolman kg, rej r. liver function.
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p.1125-77.
3. rand rn, di pasqua a. a new diazo method for the determination of bilirubin.
clin chem 1962;6:570-8.
20. 其他：儀器測定後的廢液及難降解的材料集中收集後按《檢驗科廢物處置管理規定》執行。
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