過柱子我的經驗總結

swrl20041219據網路資源整理支援小木蟲

1、選柱子：現在見到的柱子徑高比一般在1:5-10。

2、稱量：100-300目矽膠，稱30-70倍於上樣量；如果極難分，也可以用100倍量的矽膠書中寫矽膠量是樣品量的30-40倍，具體的選擇要具體分析。如果所需組分和雜質分的比較開（是指在所需組分rf在0.

2--0.4，雜質相差0.1以上），就可以少用矽膠。

3、選洗脫劑：一般淋洗劑是採用tlc分析得到的展開劑的比例再稀釋一倍後的溶劑。極性小的用乙酸乙酯：

石油醚系統；極性較大的用甲醇：氯仿系統；極性大的用甲醇：水：

正丁醇：醋酸系統。要使所需點在rf值在0.

2-0.3左右的比較好。常用溶劑的極性順序：

石油醚＜環己烷/己烷＜苯乙醚＜氯仿＜乙酸乙酯＜正丁醇＜丙酮＜乙醇＜甲醇＜水。

一般把兩種溶劑混合時，採用高極性/低極性的體積比為1/3的混合溶劑。拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸。乙酸乙酯/石油醚= 4:

1可用tlc分開。乙酸乙酯和石油醚(60-90)。

4、攪成勻漿：先把矽膠泡在燒杯中，用乾矽膠體積一倍的溶劑泡，用超聲波超半個小時，中間看到氣泡時用玻璃棒攪一下。如果洗脫劑是石油醚/乙酸乙酯/丙酮體系，就用石油醚拌；如果洗脫劑是氯仿/醇體系，就用氯仿拌。

5、裝柱：

a、用溶劑把柱子飽和一次，因為溶劑和矽膠飽和時放出的熱量可能使產品分解。b、將柱底用棉花塞緊，不必用海沙，加入約1/3體積石油醚（氯仿），裝上蓄液球，開啟柱下活塞，將勻漿一次傾入蓄液球內。隨著沉降，會有一些矽膠沾在蓄液球內，用石油醚（氯仿）將其衝入柱中。

c、裝柱時一定要保證無氣泡，同時敲打柱體使柱體更均勻、緊湊，裝畢，用洗脫液衝三次。

6、壓實：裝柱完後，加入更多的石油醚，用雙聯球或氣幫浦加壓，直至流速恆定。柱床約被壓縮至9/10體積。

無論走常壓柱或加壓柱，都應進行這一步，可使分離度提高很多，且可以避免過柱時由於柱床萎縮產生開裂。7、上樣：乾法濕法都可以。

a、在矽膠上層加少量無水硫酸鈉（以免樣品被洗脫劑沖散）取適量樣溶液上樣。上樣後，加入一些洗脫劑，再將一團脫脂棉塞至接近矽膠表面。然後就可以放心地加入大量洗脫劑，而不會沖壞矽膠表面。

b、用少量的溶劑溶樣品加樣，加完後將下面的活塞開啟，待溶劑層下降至石英砂麵時，再加少量的低極性溶劑，然後再開啟活塞，如此兩三次，一般石英砂就基本是白色的了。加入淋洗劑，一開始不要加壓，等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離（2～4cm就夠了），再加壓，這樣避免了溶劑（如二氯甲烷等）夾帶樣品快速下行。

收集的例子：10mg上樣量，1g矽膠h，0.5ml收集餾分；1-2g上樣量，50g矽膠（200-300目），20-50ml收集餾分。

接收瓶一定要用可密封的。柱子下面的活塞一定不要塗潤滑劑，會被淋洗劑帶到產品中的。9、用少量的溶劑溶樣品加樣，加完後將下面的活塞開啟。

10、檢測。要更多地使用專用噴顯劑，如果僅用紫外燈，會損失較多產品，紫外的靈敏度一般比噴顯劑底1-2個數量級。

11、送譜。收集的產品旋幹，在送譜前通常需要重結晶。如果樣品太少或為液體，可過一小凝膠柱，作為送譜前的最後純化手段。可除去氫譜1.5ppm左右所謂的「矽膠」峰。