高效液相色譜儀由高壓輸液系統、進樣系統、分離系統、檢測系統、記錄系統等五大部分組成（圖3-1-2）。分析前，選擇適當的色譜柱和流動相，開幫浦，沖洗柱子，待柱子達到平衡而且基線平直後，用微量注射器把樣品注入進樣口，流動相把試樣帶入色譜柱進行分離，分離後的組分依次流入檢測器的流通池，最後和洗脫液一起排入流出物收集器。當有樣品組分流過流通池時，檢測器把組分濃度轉變成電訊號，經過放大，用記錄器記錄下來就得到色譜圖。
色譜圖是定性、定量和評價柱效高低的依據。
圖 3-1-2 高效液相色譜儀的結構示意圖
1.高壓輸液系統
高壓輸液系統由溶劑貯存器、高壓幫浦、梯度洗脫裝置和壓力表等組成。
(1) 溶劑貯存器。溶劑貯存器一般由玻璃、不鏽鋼或氟塑料製成，容量為1～2l，用來貯存足夠數量、符合要求的流動相。
(2) 高壓輸液幫浦。高壓輸液幫浦（圖3-1-3）是高效液相色譜儀中關鍵部件之一，其功能是將溶劑貯存器中的流動相以高壓形式連續不斷地送入液路系統，使樣品在色譜柱中完成分離過程。
由於液相色譜儀所用色譜柱徑較細，所填固定相粒度很小，因此，對流動相的阻力較大，為了使流動相能較快地流過色譜柱，就需要高壓幫浦注入流動相。對幫浦的要求：輸出壓力高、流量範圍大、流量恆定、無脈動，流量精度和重複性為0.
5%左右。此外，還應耐腐蝕，密封性好。高壓輸液幫浦，按其性質可分為恆壓幫浦和恆流幫浦兩大類。
恆流幫浦是能給出恆定流量的幫浦，其流量與流動相粘度和柱滲透無關。恆壓幫浦是保持輸出壓力恆定，而流量隨外界阻力變化而變化，如果系統阻力不發生變化，恆壓幫浦就能提供恆定的流量。
圖3-1-3 恆流柱塞幫浦
(3) 梯度洗脫裝置。梯度洗脫就是在分離過程中使兩種或兩種以上不同極性的溶劑按一定程式連續改變它們之間的比例，從而使流動相的強度、極性、ph值或離子強度相應地變化，達到提高分離效果，縮短分析時間的目的。梯度洗脫裝置分為兩類：
一類是外梯度裝置（又稱低壓梯度），流動相在常溫常壓下混合，用高壓幫浦壓至柱系統，僅需一台幫浦即可。
另一類是內梯度裝置（又稱高壓梯度），將兩種溶劑分別用幫浦增壓後，按電器部件設定的程式，注入梯度混合室混合，再輸至柱系統。
梯度洗脫的實質是通過不斷地變化流動相的強度，來調整混合樣品中各組分的k值，使所有譜帶都以最佳平均k值通過色譜柱。它在液相色譜中所起的作用相當於氣相色譜中的程式公升溫，所不同的是，在梯度洗脫中溶質k值的變化是通過溶質的極性、ph值和離子強度來實現的，而不是借改變溫度（溫度程式）來達到。
2.進樣系統
進樣系統包括進樣口、注射器和進樣閥等，它的作用是把分析試樣有效地送入色譜柱上進行分離。六通進樣閥是最理想的進樣器，其結構如圖3-1-4。
圖3-1-4 六通進樣閥裝置
3.分離系統
分離系統包括色譜柱、恆溫器和連線管等部件。色譜柱一般用內部拋光的不鏽鋼製成，如圖3-1-5。其內徑為2 ~ 6mm，柱長為10 ~50cm，柱形多為直形，內部充滿微粒固定相，柱溫一般為室溫或接近室溫。
圖 3-1-5 常見色譜柱外形
4.檢測器
最常用的檢測器為紫外吸收檢測器，它的典型結構如圖3-1-6。
圖3-1-6 紫外檢測器光路圖
1-低壓汞燈 2-透鏡 3-遮光板 4-測量池 5-參比池 6-紫外濾光片 7-雙紫外光敏電阻
檢測器是液相色譜儀的關鍵部件之一。對檢測器的要求是：靈敏度高，重複性好、線性範圍寬、死體積小以及對溫度和流量的變化不敏感等。
在液相色譜中，有兩種型別的檢測器，一類是溶質性檢測器，它僅對被分離組分的物理或物理化學特性有響應。屬於此類檢測器的有紫外、螢光、電化學檢測器等；另一類是總體檢測器，它對試樣和洗脫液總的物理和化學性質響應。屬於此類檢測器有示差折光檢測器等。
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