培養基適用性檢查
驗證方案
檔案編號：vmp-vv-501-00
起草人審核人
批准人 批准日期： 年月日
驗證立項申請表
驗證方案審批表
1.概述
通過驗證以確認所採用的培養基適合於細菌、黴菌及酵母菌的測定及控制菌的檢查，根據特性制訂檢驗方法和檢驗條件，按制定的方法進行試驗，根據驗證結果判斷是否符合驗證標準。若符合，按驗證的方法和條件進行微生物限度檢查；若不符合，重新建立制訂檢驗方法和檢驗條件，再進行驗證，直至驗證結果符合設立的驗證標準。
2.驗證目的及範圍
為了確認所採用細菌、黴菌及酵母菌計數和控制菌檢查的培養基是否符合微生物限度檢查法的規定要求，以保證檢驗結果的準確、可靠及檢驗方法的完整性。
3.驗證風險評估
對於本次驗證的執行進行了如下的風險分析：
4.驗證前準備
4.1驗證人員培訓：驗證報告起草人有責任在方案批准後（且在驗證實施前）對本次驗證相關人員進行培訓。培訓人員記錄見附件1。
4.2將所有的平皿和稀釋劑都應該嚴格按照相關的滅菌程式消毒，以確保其對試驗的結果沒有影響。
4.3儀器與器具：恆溫培養箱、生化培養箱、高壓蒸汽滅菌器、淨化工作台、無菌培養皿、無菌移液管。
5.驗證內容
5.1測試環境條件要求
所有檢查在環境潔淨度c級下的區域性a級潔淨度的單向流空氣區域內隔離系統內進行，其全過程嚴格遵守無菌操作，能防止微生物汙染。
5.2計數培養基
5.2.1驗證用菌種及培養基：
5.2.1.1**： 食品藥品檢驗所
5.2.1.2菌落計數用菌種
注：編號由菌種首字母-傳代代數-配製日期組成。
5.2.2培養基及其製備方法：取市售的脫水培養基，分別按照規定方法進行配製後灌裝於潔淨的三角燒瓶中，然後加塞滅菌，在實驗前加溫熔化備用。
5.2.3菌液製備
5.2.3.
1接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養物至10ml營養肉湯培養基中，30～35℃培養18～24小時，取此培養液1ml，加0.9％無菌氯化鈉溶液至10ml，採用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-6～10-7，使菌數約為50～100cfu/ml，做活菌計數備用。
5.2.3.
2接種白色念珠菌的新鮮培養物至10ml改良馬丁培養基中，23～28℃培養24～48小時，取此培養液1ml，加0.9％無菌氯化鈉溶液至10ml，採用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-6～10-7，使菌數約為50～100cfu/ml，做活菌計數備用。
5.2.3.
3接種黑麴黴的新鮮培養物至改良馬丁瓊脂斜面培養基上，23～28℃培養5～7天的用3～5ml 含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。
然後，吸出孢子懸液（用管口帶有薄的無菌棉花或紗布能過濾絲的無菌毛細吸管）至無菌試管中，取1ml加含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液至10ml，採用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-4～10-6,製成每1ml含孢子數50～100cfu的孢子懸液備用。
5.2.4驗證方法：
5.2.4.
1試驗組：取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌各1ml，分別注入無菌平皿中，立刻傾注營養瓊脂培養基，每株試驗菌平行製備2個平皿，混勻，凝固，置30～35℃培養48小時，計數、觀察菌落情況；取白色念珠菌、黑麴黴各1ml，分別注入無菌平皿中，立刻傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養基，每株試驗菌平行製備2個平皿，混勻，凝固，置23～28℃培養72小時，計數、觀察菌落情況。測定結果見附件2。
5.2.4.
2對照組：取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌各1ml，分別注入無菌平皿中，立刻傾注營養瓊脂對照培養基，每株試驗菌平行製備2個平皿，混勻，凝固，置30～35℃培養48小時，計數、觀察菌落情況；取白色念珠菌、黑麴黴各1ml，分別注入無菌平皿中，立刻傾注玫瑰紅鈉瓊脂對照培養基，每株試驗菌平行製備2個平皿，混勻，凝固，置23～28℃培養72小時，計數、觀察菌落情況。測定結果見附件2。
5.2.4.3菌**率計算：
_;_jt_*試驗組的菌**率（%）=（試驗組平均菌落數/ 對照組平均菌落數）×100% _`h___1__2
5.2.5判定標準：菌**率均應不低於70%，且菌落形態大小與對照培養基上的菌落一致。
5.2.6結論：對計數培養基適用性檢查的驗證結果進行評價和總結。
5.3控制菌培養基適用性檢查：
5.3.1驗證用菌種：
5.3.1.1**： 食品藥品檢驗所
5.3.1.2驗證用菌種
5.3.1.3培養基及其製備方法：取市售的脫水培養基，分別按照規定的方法進行配製後灌裝於潔淨的三角燒瓶中，然後加塞滅菌。在實驗前加溫熔化備用。
5.3.2菌液製備：
接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌的新鮮培養物至10ml營養肉湯培養基中，30～35℃培養18～24小時，取此培養液1ml加0.9％無菌氯化鈉溶液至10ml，採用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-4～10-6，使細菌數約為500～1000cfu/ml。
5.3.3驗證方法：
5.3.3.
1促生長能力培養基：取大腸埃希菌各0.1ml，分別塗佈於膽鹽乳糖培養基、mug培養基和乳糖膽鹽發酵培養基及其對照培養基上，在30～35℃培養18小時，觀察菌落情況。
測定結果見附件3。
5.3.3.
2抑制能力培養基：取金黃色葡萄球菌各0.2ml，分別塗佈於膽鹽乳糖培養基和乳糖膽鹽發酵培養基及其對照培養基上，在30～35℃培養18小時，觀察菌落情況。
測定結果見附件3。
5.3.3.
3指示能力培養基：取大腸埃希菌各0.2ml，分別塗佈於乳糖膽鹽發酵培養基及其對照培養基上，在30～35℃培養18小時，觀察菌落情況。
測定結果見附件3。
5.3.4判定標準：
5.3.4.1促生長能力培養基：試驗培養基與對照培養基生長的菌落大小、形態特徵應一致。
5.3.4.2抑制能力培養基：試驗菌均不得生長。
5.3.4.3指示能力培養基：試驗培養基與對照培養基生長的菌落大小、形態特徵、指示劑反應情況等應一致。
5.3.5結論：對控制菌培養基適用性檢查的驗證結果進行評價和總結。
6.變更和偏差處理：
驗證過程中如果出現偏差和變更，應立即通知驗小組對偏差和變更進行詳細記錄，分析偏差產生的根本原因並提出解決方法。所有偏差和變更得到有效處理後，驗證方可進入下一步驟。偏差處理單和變更單經過批准後其原件必須附在驗證報告中。
見附件4。
7.驗證結果評定及結論：
質量部負責收集各項驗證試驗結果，起草驗證報告，報驗證委員會。
驗證委員會負責對驗證結果進行綜合評審，做出驗證結論，發放驗證證書，確認培養基適用性檢查情況。見附件5。
8.擬定再驗證週期：
驗證小組根據驗證情況，擬定再驗證週期，報驗證領導小組審批。
9.會審及批准
會審：批准：
附件1培訓人員記錄表
附件2營養瓊脂計數培養基
附件3控制菌檢查用培養基
附件4偏差處理與變更記錄附件5
培養基適用性檢查方法的驗證
檔案編號 制訂日期 審核日期 批准日期 雲南雲科藥業 a 驗證方案 方案制訂 制訂日期 方案編號 方案審核 審核日期 方案批准 批准日期 雲南雲科藥業 目錄1 驗證專案名稱 2 驗證組織 3 概述 4 驗證目的 5 參照標準 6 驗證程式 7 驗證報告 評價及批准 1 驗證專案名稱 培養基適用性檢查...
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