20101897 生物科學（1）班劉春蓉
生物學是一門以實驗為基礎的自然科學，現代生物科學的發展尤其依賴科學實驗。在生物教學中，實驗、學習和觀察等實踐環節對我們掌握生物學知識、科學方法、培養我們的動手能力和形成科學素質都起到了至關重要的作用。正是因此，從我們開始接觸生物這門學科開始，就不斷有生物實驗課程，鍛鍊我們各式各樣的能力
首先實驗之前要做好充分的準備，認識聽老師實驗前的講解，因為該過程有許多操作技能和注意事項。通過植物細胞培養基的配製掌握了配製培養基母液的基本技能，了解液體和固體細胞培養基的配製方法。在這次實驗中一定要注意滅菌，使用高壓蒸汽滅菌鍋逃注意放氣閥的開放。
還有超淨工作台的使用，要紫外滅菌和通風二十分鐘，此時人要遠離超淨工作台。
通過動物細胞的觀察和培養了解了傳代細胞培養的基本方法以及在細胞培養過程中嚴格的操作程式。初步掌握無菌操作的基本原則。認識無菌操作在細胞培養中的重要性。
學會利用顯微鏡觀察細胞形態，對貼壁細胞進行傳代，並掌握細胞計數方法。通過對這次實驗我認識到顯微鏡使用的重要性，並不是說你會使用了就好了，而是要準確快速的使用。這就需要我們反覆使用，在使用過程中掌握技巧。
比如**載玻片時要找到所要觀察的細胞形態時就要熟悉熟悉操作步驟以及調焦等技能。如果我沒有熟悉這些技巧那就會導致觀察所需的時間比別的同學多甚至有可能找不到所要觀察的目標。該次實驗讓我更進一步的掌握了顯微鏡的使用，已能夠快速準確的找到所要觀察的目標。
在pcr擴增分離dn**段中了解多聚合酶鏈反應dna擴增技術的基本原理和實驗應用。對於pcr議的使用還不太熟練，但對於pcr擴增分離有了個初步的了解。
後來pcr成為實驗最基本的一步了，但是發現在pcr中還是有許多需要注意的地方。pcr的第一步就是引物設計了。引物設計需要注意的地方很多，在大多數情況下，我們都是在知道已知模板序列時進行pcr擴增的。
在某些情況比如構建文庫的時候也會在不知道模板序列的情況下進行設計。這個時候隨機核苷酸序列就與模板不是完全匹配。我們通常指的設計引物都是在已知模板序列的情況下進行。
設計的目的是在兩個目標間取得平衡：擴增特異性和擴增效率。引物分析軟體將試圖通過使用每一引物設計變化的預定值在這兩個目標間取得平衡。設計引用有一些需要注意的基本原理：
①引物長度
一般引物長度為18~30鹼基。總的說來，決定引物退火溫度（tm值）最重要的因素就是引物的長度。有以下公式可以用於粗略計算引物的退火溫度。
在引物長度小於20bp時：[4(g+c)+2(a+t)]-5℃
在引物長度大於20bp時：62.3℃+0.41℃(%g-c)-500/length-5℃
另外有許多軟體也可以對退火溫度進行計算，其計算原理會各有不同，因此有時計算出的數值可能會有少量差距。為了優化pcr反應，使用確保退火溫度不低於54℃的最短的引物可獲得最好的效率和特異性。
總的說來，每增加乙個核苷酸引物特異性提高4倍，這樣，大多數應用的最短引物長度為18個核苷酸。引物長度的上限並不很重要，主要與反應效率有關。由於熵的原因，引物越長，它退火結合到靶dna上形成供dna聚合酶結合的穩定雙鏈模板的速率越小。
②gc含量
一般引物序列中g+c含量一般為40%~60%，一對引物的gc含量和tm值應該協調。若是引物存在嚴重的gc傾向或at傾向則可以在引物5』端加適量的a、t或g、c尾巴。
③退火溫度
退火溫度需要比解鏈溫度低5℃，如果引物鹼基數較少，可以適當提高退火溫度，這樣可以使pcr的特異性增加；如果鹼基數較多，那麼可以適當減低退火溫度，是dna雙鏈接合。一對引物的退火溫度相差4℃～6℃不會影響pcr的產率，但是理想情況下一對引物的退火溫度是一樣的，可以在55℃～75℃間變化。
④避免擴增模板的二級結構區域
選擇擴增片段時最好避開模板的二級結構區域。用有關計算機軟體可以**估計目的片段的穩定二級結構，有助於選擇模板。實驗表明，待擴區域自由能（△g）小於58.
6lkj/mol時，擴增往往不能成功。若不能避開這一區域時，用7-deaza-2』-脫氧gtp取代dgtp對擴增的成功是有幫助的。
最後個實驗室電泳檢測，經過這個實驗後我們了解到了核酸瓊脂糖凝膠電泳的原理，學會其具體的操作程式；對提取的dna進行檢測，掌握紫外電泳圖譜的觀察分析方法。主要對電泳儀有了初步的認識，學會了電泳儀和電泳槽的使用，學會了對於螢光條帶的簡單分析。
在這次實訓期間自身的能力有了全面的提高。不僅對理論知識有了進一步的了解更重要的事在實際操作過程中自己的動手操作能力得到了顯著的提高。而且在整個實驗過程中，我很高興能認識親愛的歐陽老師，（乙個很耐心很細心的老師！
) 歐陽老師會很體諒一些先開始忙活的同學，在黑板上寫清他們實驗大概會做到的步驟和注意事項，後面實驗的準備物品和要求，然後開始在忙於實驗而奔走中的同學之間巡視。觀察我們的實驗操作，或是時不時提點解釋一下我們實驗步驟的緣由;實驗藥品的作用;如何做會得到更好的結果;實驗沒有得到好的結果或是做的失敗了的原因。
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