1 目的
確保革蘭氏染色的正確操作，使革蘭氏染色的操作得到有效控制，以提供穩定的實驗結果。
2 適用範圍
適用於本公司微生物實驗室革蘭氏染色實驗。
3 職責
實驗室技術人員應遵循此程式，確保按標準操作規程進行革蘭氏染色。
4 程式
4.1革蘭氏染色原理
通過結晶紫初染和碘液媒染後，在細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的複合物，革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚、肽聚醣網層較多且交聯緻密，故遇丙酮脫色處理時，因失水反而使網孔縮小，再加上它不含類脂，故丙酮處理不會出現縫隙，因此能把結晶紫與碘複合物牢牢留在壁內，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚醣層薄且交聯度差，在遇脫色劑後，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而鬆散的肽聚醣網不能阻擋結晶紫與碘複合物的溶出，因此通過丙酮脫色後仍呈無色，再經番紅等紅色染料復染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。
4.2實驗物品
滅菌玻片、接種環、移液器、酒精燈、計時器、顯微鏡、香柏油、革蘭氏染色液等。
4.3實驗步驟
，用移液器吸取10ul待檢樣品滴在載玻片的**，用移液器分別吸取10ul金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌位於待檢品的兩側（中間要有足夠的空間），分別作為陰陽性對照。用無菌接種環將液滴塗佈成均勻的薄層，塗佈面不宜過大。
，手持載玻片一端的兩側，小心地在酒精燈火焰高處微微加熱，使水分蒸發，但切勿緊靠火焰或加熱時間過長，以防標本烤枯而變形。
，手持載玻片的一端，標本向上，在酒精燈火焰處盡快的來回通過2-3次，共約2-3秒種，並不時以載玻片背面加熱觸及**，不覺得燙為宜（不超過60℃），放置待冷後，進行染色。
，使染色液覆蓋塗片，染色約1min。
，用洗瓶小股水流沖洗，直至洗下的水呈無色為止。
，使染色液覆蓋塗片，染色約1min。
，用洗瓶小股水流沖洗，直至洗下的水呈無色為止。
，滴加革蘭氏脫色劑脫色，至流出的脫色劑不現紫色為止，大約需時20-30s，隨即水洗。
，使染色液覆蓋塗片，染色約1min。
，用洗瓶小股水流沖洗，直至洗下的水呈無色為止。
，待標本片幹後置顯微鏡下觀察。
，用低倍鏡觀察，發現目標物後滴一滴香柏油在玻片上，用油鏡觀察細菌的形態及顏色。
4.4結果判定
顯微鏡觀察由金黃色葡萄球菌製成的標本顯示葡萄球狀藍紫色，大腸埃希菌製成的標本顯示桿狀紅色，則實驗過程有效。一方不成立則實驗結果無效。
此時，如果樣品在顯微鏡下呈藍紫色，則判定樣品菌株為革蘭氏陽性菌；如果樣品在顯微鏡下呈紅色，則判定樣品菌株為革蘭氏陰性菌。
4.5實驗結束
，按顯微鏡使用、維護和保養規程的要求，關閉和清潔顯微鏡。
，根據工具的不同選擇不同的滅菌方式，確保物品丟棄前均已滅菌。
，使用前用75%酒精浸泡，清洗乾淨風乾滅菌後應用；使用後滅菌，按廢棄物處理程式處理。
5相關檔案
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6修訂內容
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