沉澱蛋白題庫

2023-01-24 10:15:03 字數 2122 閱讀 5012

1、 去除蛋白質的方法有哪些?

答:(1) 加入與水混溶的有機溶劑;

(2).加入中性鹽;

(3).加入強酸;

(4).加入重金屬鹽;

(5).超濾法;

(6).酶水解法;

(7).加熱法.

2、 去除蛋白質的意義是什麼?

答:使結合型藥物釋放出來,以便測定藥物的總濃度;得到較「乾淨」的提取液,減少乳化;消除對測定的干擾;保護儀器,延長使用期限。

3、 沉澱蛋白中加入甲醇或乙腈的目的是什麼?

答:加入水溶性的有機溶劑甲醇或乙腈,可使蛋白質的分子內及分子間的氫鍵發生變化而是蛋白凝聚,是蛋白質結合的藥物釋放出來。

4、 ,有機溶劑沉澱蛋白的原理是什麼?

答:原理是降低水的介電常數,導致具有表明水層的生物大分子脫水,相互聚集,最後析出。

5、 用強酸沉澱蛋白的原理是什麼?

答:痠沉試劑(高氯酸等)原理是,在低於蛋白質等電點的ph條件下,蛋白質陽離子與沉澱劑的陰離子形成難溶性鹽而沉澱,蛋白變性而沉澱。

6、 常見蛋白沉澱劑的試劑有:甲醇、乙腈、乙醇、丙酮、高氯酸、四氫呋喃、三氯乙酸。(至少寫三種)

7、 沉澱蛋白的操作步驟:血漿樣品解凍,渦流混勻備用。在ep管中,依次加入內標、血漿樣品、沉澱試劑,之後渦流混勻,15000 rpm離心5 min,取上清進樣分析。

8、 用甲醇、乙腈作為沉澱試劑時,血漿與沉澱劑的比例是多少?

答:一般用血漿與沉澱劑的比例為乙腈最低1:2(一般1:3以上),甲醇最低1:3(一般1:5以上)。

9、 簡述沉澱蛋白的注意事項(答案開放,僅供參考)

答:(1)渦流混勻一定要充分,至少30 s以上;

(2)沉澱試劑量一定要足,沉澱要充分。

(3)有時需要考慮溶劑效應,對峰型的影響

(4)熱不穩定的藥物,離心時需要冷凍離心。

(5)注意操作,防止汙染。

10、 比較下面沉澱試劑的沉澱效率:甲醇、乙腈、乙醇、高氯酸。

答:高氯酸》乙腈》乙醇≥甲醇。

表1常見沉澱試劑的蛋白沉澱效率

11、 與液液萃取和固相萃取相比,沉澱蛋白的優缺點是什麼?(答案開放,僅供參考)

答:優點:簡單、方便、迅速、提取**率高、成本低、易於操作

缺點:雜質多,對特殊的藥物基質效應強。

將待測物稀釋,不能達到濃縮的作用,待測物含量低時不適用。

上清比較髒,柱壓高,有可能會導致系統堵塞。

12、 簡述沉澱蛋白的基質效應、提取**率的操作過程

答:提取**率(re):空白基質,加入沉澱試劑後,渦流混勻,離心。

在上清中加入一定量的的內標和標係,渦流混勻進樣。與qc比較峰面積。基質效應(me):

加入內標和標係,加入水(代替空白基質),然後沉澱試劑,渦流,進樣。與上述re比較峰面積。

13、 沉澱蛋白以後,進lc-ms分析,出現哪些情況,需要考慮將上清液稀釋?

答:有溶劑效應,峰型不好;

響應高,最高點可能會導致系統飽和;

基線高,基質效應大(前提是訊號響應夠)。

14、 如果外標響應很高,沉澱蛋白後,響應特別低,怎樣判斷是共沉澱還是基質效應導致的?

答:沉澱空白基質,在上清中加入內標和標係,看響應,如果響應高,那證明是共沉澱,如果仍沒有響應,說明是基質效應的影響。

15、 二氯甲烷反提的原理是什麼?

答:二氯甲烷與乙腈的溶解能力比水強,能將乙腈完全從水相中提取出來。二氯甲烷將乙腈提取出來,藥物留在上層水相,相當於濃縮。

甲醇在二氯甲烷和水中都有一定的溶解,所以反提一般不用甲醇。

16、 二氯甲烷反提時,二氯甲烷的量怎麼確定?水相在上層還是下層?

答:乙腈:二氯甲烷的比例1:3左右。水相在上層。

17、 什麼藥物適合用二氯甲烷反提?

答:一些極性大的,在水相的溶解性強的藥物。

18、 簡述二氯甲烷反提的操作流程。

答:血漿樣品室溫解凍後,渦流混勻後,精密取內標、血漿樣品、乙腈,混勻,離心。取上清加入二氯甲烷,渦流混合,離心,取上層水相進樣。

19、 影響沉澱效率的因素有哪些?

答:沉澱試劑的選擇,沉澱試劑的倍數,渦流時間,離心的轉速、時間和溫度。

20、 甲醇與乙腈沉澱蛋白的現象有什麼不同?

答:乙腈——塊狀絮凝物、易於分離;成分損失可能性大。

甲醇——細小顆粒沉澱、不易分離;成分損失可能性小。

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