1）陽性對照的目的很簡單，看系統是否work，一般是加入已知模板，其它成分和實驗組一致。
如果陽性對照不出結果，問題比較麻煩，需要乙個乙個組分更換，檢測是否失效，最常見是酶。
陰性對照的目的主要是檢測是否存在汙染。一般不加模板。
如果陰性對照出條帶，問題也比較麻煩，需要乙個乙個組分設陰性對照檢測，排除汙染源，最常見是水。
pcr的
陽性對照是，你要檢測的專案對應的已知的陽性項，是檢查你的系統是否工作。如果系統正常的話，可以看到陽性結果。
陰性對照是，如果實驗系統正常工作，擴增不出你所要的目的片段的陰性項。所用的每一項都可設陰性對照，根據你的目的而定。
pcr的對照只是監控你pcr的過程，如果你利用pcr來檢測你上乙個實驗的結果，那你上乙個實驗也要有相應對照。
2）聚合酶鏈式反應是一種用於放大擴增特定的dn**段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊dna複製，pcr的最大特點，是能將微量的dna大幅增加。
pcr(聚合酶鏈式反應）是利用dna在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經常是60°c左右）時引物與單鏈按鹼基互補配對的原則結合，再調溫度至dna聚合酶最適反應溫度（72°c左右），dna聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。基於聚合酶製造的pcr儀實際就是乙個溫控裝置，能在變性溫度，復性溫度，延伸溫度之間很好地進行控制。
pcr反應條件的選擇
pcr反應條件為溫度、時間和迴圈次數。
溫度與時間的設定： 基於pcr原理三步驟而設定變性-退火-延伸三個溫度點。在標準反應中採用三溫度點法，雙鏈dna在90～95℃變性，再迅速冷卻至40 ～60℃，引物退火並結合到靶序列上，然後快速公升溫至70～75℃，在taq dna 聚合酶的作用下，使引物鏈沿模板延伸。
對於較短靶基因(長度為100～300bp時)可採用二溫度點法， 除變性溫度外、退火與延伸溫度可合二為一，一般採用94℃變性，65℃左右退火與延伸(此溫度taq dna酶仍有較高的催化活性)。
①變性溫度與時間：變性溫度低，解鏈不完全是導致pcr失敗的最主要原因。一般情況下，93℃～94℃lmin足以使模板dna變性，若低於93℃則需延長時間，但溫度不能過高，因為高溫環境對酶的活性有影響。
此步若不能使靶基因模板或pcr產物完全變性，就會導致pcr失敗。
②退火(復性)溫度與時間：退火溫度是影響pcr特異性的較重要因素。變性後溫度快速冷卻至40℃～60℃，可使引物和模板發生結合。
由於模板dna 比引物複雜得多，引物和模板之間的碰撞結合機會遠遠高於模板互補鏈之間的碰撞。退火溫度與時間，取決於引物的長度、鹼基組成及其濃度，還有靶基序列的長度。對於20個核苷酸，g+c含量約50%的引物，55℃為選擇最適退火溫度的起點較為理想。
引物的復性溫度可通過以下公式幫助選擇合適的溫度：
tm值(解鏈溫度)=4(g+c)＋2(a+t)
復性溫度=tm值-(5～10℃)
在tm值允許範圍內， 選擇較高的復性溫度可大大減少引物和模板間的非特異性結合，提高pcr反應的特異性。復性時間一般為30～60sec，足以使引物與模板之間完全結合。
③延伸溫度與時間：taq dna聚合酶的生物學活性：
70～80℃ 150核苷酸/s/酶分子
70℃ 60核苷酸/s/酶分子
55℃ 24核苷酸/s/酶分子
高於90℃時， dna合成幾乎不能進行。
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