植物基因組DNA提取試劑盒 北京天根

2023-01-18 17:21:06 字數 1119 閱讀 9347

1 取植物新鮮組織約100 mg或乾重組織約30 mg,加入液氮充分研磨。

2 將研磨好的粉末迅速轉移到預先裝有700 μl 65℃預熱緩衝液gp1的離心管中(實驗前在預熱的gp1中加入巰基乙醇,使其終濃度為0.1%),迅速顛倒混勻後,將離心管放在65℃水浴20 min,水浴過程中顛倒離心管以混合樣品數次。

3 加入700 μl氯仿,充分混勻,12,000 rpm(~13,400×g)離心5 min。

注:若提取富含多酚或澱粉的植物組織,可在第3步前,用酚:氯仿/1:1進行等體積抽提。

4 小心的將上一步所得水層上相轉入乙個新的離心管中,加入700 μl緩衝液gp2,充分混勻。

5 將混勻的液體轉入吸附柱cb3中,12,000 rpm(~13,400×g)離心30 s,棄掉廢液。(吸附柱容積為700μl左右,可分次加入離心。)

6 向吸附柱cb3中加入500 μl緩衝液gd(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g)離心30 s,倒掉廢液,將吸附柱cb3放入收集管中。

7 向吸附柱cb3中加入600 μl漂洗液pw(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g)離心30 s,倒掉廢液,將吸附柱cb3放入收集管中。

8 重複操作步驟7。

9 將吸附柱cb3放**集管中,12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min,倒掉廢液。將吸附柱cb3置於室溫放置數分鐘,以徹底晾乾吸附材料中殘餘的漂洗液。

注意:這一步的目的是將吸附柱中殘餘的漂洗液去除,漂洗液中的乙醇的殘留會影響後續的酶反應(酶切、pcr等)實驗。

10 將吸附柱cb3轉入乙個乾淨的離心管中,向吸附膜的中間部位懸空滴加50-200 μl洗脫緩衝液te,室溫放置2-5 min,12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min,將溶液收集到離心管中。

注意:洗脫緩衝液體積不應少於50 μl,體積過小影響**率。洗脫液的ph值對於洗脫效率有很大影響。

若用水做洗脫液應保證其ph值在7.0-8.5範圍內(可以用naoh將水的ph值調到此範圍),ph值低於7.

0會降低洗脫效率;且dna產物應儲存在-20℃,以防dna降解。為增加基因組dna的得率,可將離心得到的溶液再加入吸附柱cb3中,室溫放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min。

動物組織基因組DNA的提取

4.加入200 l無水乙醇,充分振盪混勻15s,此時可能出現絮狀沉澱,簡短離心以去除管蓋內壁的水珠。沉澱dna 6.向吸附柱cb3中加入500 l緩衝液gd 使用前先檢查是否已加入無水乙醇 12,000rpm 13,400 g 離心30s,倒掉廢液,將吸附柱cb3放 集管中。7.向吸附柱cb3中加入...

CTAB提取植物DNA步驟

一 將冷凍乾燥的樣品用液氮研磨成粉末,轉移到離心管,加入65 預熱的2ml ctab抽提液,65 保溫30 min 以上,間或輕搖混勻 12 000 r min室溫離心10 min,取上清液 二 加入等體積的苯酚 氯仿 異戊醇 25 24 1 輕輕混勻15 min以上,12 000 r min室溫離...

植物總DNA的提取

採用常規ctab法抽提植物基因組dna,步驟如下 1 取約0.3 g植物葉片,在液氮中研磨成粉末 2 迅速將粉末轉移到2 ml的離心管中,加入4倍體積 w v 預熱的ctab提取緩衝液 含2 巰基乙醇 溫和混勻 3 65 保溫30 60 min,期間不時搖動,使其充分混勻 4 12,000 rpm離...