akta層析系統標準操作規程
在使用akta前，請先閱讀本規程，並了解所需層析方法的原理。初次使用請在有經驗的人指導下進行。
一. 緩衝液和層析的樣品的準備：
1. 溶液需用去離子水、超純水或注射用水配製，除naoh和乙醇外，所有用於層析的緩衝液需經0.45μm孔徑的濾膜過濾，並盛裝於用0.
45μm孔徑濾膜過濾的水至少蕩洗4次的容器中。
2. 實驗過程中用到的20%乙醇應用新的無水乙醇和0.45μm孔徑濾膜過濾的水配製；0.1m naoh用0.45μm孔徑濾膜過濾的水和固體naoh配製。
3. 盛裝緩衝液的應使用小口有蓋圓底容器，最好可滅菌，如藍口瓶，無水乙醇瓶。燒杯（敞口，易汙染長菌）、血清瓶（多死角，易長菌）不適合用於盛裝緩衝液。
4. 配製的緩衝液成分不宜濃度過高，如硫銨不得超過2m（約50%飽和硫銨）；nacl不得超過4m；pb不得超過500mm；以免析出固體損壞層析介質與儀器。
5. 緩衝液要多次使用，需在120℃滅菌20min，此後置於4℃儲存，下回層析時平衡至室溫使用，使用前應搖晃無可見異物方可使用，否則，應重新過濾。
6. 用於層析的樣品通常要用12000rpm離心10min，上清用0.22μm過濾後才可以用於層析。經過層析後收集的樣品如無沉澱可免去離心和過濾的步驟。
7. 用於離子，疏水層析的樣品應經預實驗不會在該層析條件下樣品在低鹽和高鹽條件下穩定不析出沉澱。
二. akta儀器的使用：
1.開關機
⑴開啟電腦，檢查電腦執行狀態是否正常。
⑵開啟akta總電源按鈕(akta儀器一般分為2-3個模組，每個模組有單獨的電源開關，通常為開啟狀態，總電源開關一般用於開關儀器)，稍後開啟akta控制軟體unicorn，並等待儀器自檢和聯機，每個模組自檢成功後會發出「嘀---嘀嘀」的聲音，相應在儀器上顯示自檢通過的字樣。軟體開啟後會同時開啟4個介面，從左到右依次是：檔案管理介面、程式編輯介面，儀器控制介面，圖線分析介面。
與儀器連線成功後，儀器控制介面下方儀器簡圖線路變成綠色，儀器會從幫浦內走一段液體至廢液。如未連線成功，操作介面會彈出提示視窗，此時請檢查儀器與電腦資料線插頭是否鬆動，而後關閉儀器和程式，重新開啟，必要時可重新啟動電腦。如經過以上步驟還無法連線，請聯絡管理員。
⑶使用完儀器應在檔案管理介面關閉unicorn程式，系統將提示是否鎖定介面，選否，待unicorn完全退出後方可關閉儀器電源。使用完畢後需清理檯面，並登記使用事項。
2．akta儀器的執行
⑴在開啟流速之前，將ab管道插入緩衝液中，遵循a低鹽，b高鹽或者a高ph, b低ph的原則，若只用一種緩衝液，請將ab管道都插入緩衝液中，然後ab幫浦各走50%。在裝上柱子之前應先用高流速將管道中替換成自己相應緩衝液。
⑵若樣品量低於10ml，用上樣環進樣比較簡便和準確。選用合適上樣環，在裝柱前連線上儀器，在清洗管道時調至inject一併清洗，並且裝上層析柱後隨柱子一起平衡。上樣時，先在inject下插入注射器，調至load，打入緩衝液，改為inject，上樣。
⑶在儀器控制介面可通過電腦控制流速，a/b幫浦流速比例，上樣環狀態切換，uv歸零，壓力上限，以及標註和定時暫停等。流速和壓力控制要按照不同的介質、柱型號的使用方法嚴格嚴格執行（引數見附表）。特別需要注意的是，在使用時要設定最高壓力警報，以避免操作不當造成柱子爆裂，甚至儀器損壞。
akta使用過程中請檢查各部分的運**況，如有問題及時聯絡管理員。
⑷同時，在使用時，請確保位於儀器一側的，50ml管裝的20%乙醇正在迴圈流動（用於清洗壓力幫浦），並且20%乙醇無渾濁或乾涸現象。若發生斷流或液體渾濁，請及時更換並用注射器抽取，讓液體充滿管道，避免對壓力幫浦造成損害。
⑸使用naoh以及鹽濃度較高的緩衝液清洗管道或柱子時儘量減少漏液，如漏到儀器上時請及時擦拭乾淨，避免腐蝕akta。柱子使用完後要及時拆卸，以便他人使用。注意柱子拆卸後要在相應介面連線一條管道，避免汙染雜質，染菌或檢測探頭由於緩衝液乾涸鹽析造成損壞。
⑹當發現壓力檢測器或ph計不准時，及時通知管理員進行校正。
⑺執行結束後請及時儲存實驗結果，並歸於各人自己目錄下，便於整理和存檔。
三、層析柱和介質的使用：
1.裝柱
⑴原先在溶液中的介質通常可以用水或乙醇（20%）裝柱，乾粉介質（如g25）需在水中溶脹1h以上，方可裝柱。chtii需在200mm pb溶液中溶脹1h後，用200mm pb裝柱。
⑵拆下柱子，清洗柱腔和管道，將位於下方的一端（較短的）接上akta儀器，揭下防水膜，以5~10ml/min流速排出防水膜下的氣泡，蓋上防水膜，裝上柱腔，繼續在柱腔底部注滿2cm左右的溶液，將計算好體積的介質貼壁緩慢倒入柱腔內，要防止氣泡的產生。將管道從儀器上卸下，讓溶液流出，介質隨著沉降。當介質沉降完全後，堵上下端出口。
⑶將位於上方的一端接上儀器如⑵排去氣泡後，向柱腔內緩慢注水至上柱面，將上端插入柱腔，鎖在介質面上方約1cm處。
⑷按附表中相應柱子介質的流速壓介質5min，當介質面穩定後用筆在柱外相應位置做記號。稍微鬆開上方，將上端壓至標記處，（cht ii介質壓至標記上方1mm處）旋緊。層析柱就可以使用了。
⑸分子篩類介質應倒裝層析柱。
2．層析柱和介質使用注意事項
⑴tsk的高壓預裝柱也可以在akta上使用，但要注意流速和壓力（詳見附表）
⑵在裝柱和卸柱時要將柱頭上的液體充滿，再連上連線頭或堵頭。裝柱時要先用1/2流速倒衝柱子，趕出氣泡，再連上接頭，以免氣泡進入介質內。
⑶實驗過程中應保持柱子豎直，特別是分子篩。整個實驗操作過程中都要防止氣泡進入介質內。常壓層析柱使用較久後，柱壓可能會上公升，應適當降低流速。
若層析柱在實驗過程**現幫浦壓急劇公升高，超過限度的情況，請聯絡管理員。
⑷在實驗結束後，非高壓柱應用0.1m naoh清洗，最後儲存於naoh或20%乙醇中；cht ii介質用0.1m naoh清洗不宜超過2倍柱體積，最後應儲存於水或20%乙醇中；高壓預裝柱除g3000sw外用0.
1m naoh清洗，儲存於超純水中；g3000 sw用超純水清洗，儲存於超純水中。柱子卸下時，2端柱頭都應先充滿液體，再接上堵頭，放4℃儲存，經常使用的可放室溫儲存。
四. 使用後登記及檯面清潔
1. 將使用的各部件放置原有位置，在登記表上如實填寫儀器使用狀態，登記使用日期和使用人。
2. 帶走自己的物品，保持桌面清潔。再次注意，儀器上如有緩衝液外漏，請擦拭乾淨以免腐蝕儀器。
撰寫人： 魏旻希 139********
附表：各層析柱與介質的引數
一、 常壓柱：
1. 常壓預裝柱：
包括hitrap sepharose ff系列，hitrap sepharose hp系列，hitrap sepharose xl系列，hitrap desalting（g25）系列，superdex 系列：
2. 常壓柱子（進口）：
有夾套的進口柱子，xk a/b表示內徑為a（mm），高為b（cm）
3. 常壓柱子（國產）：
國產柱子，a*b表示內徑為a（mm），高為b（cm）
4. 常壓介質：
cht ii為biored產品，spa (protein a)-sepharose 4b自產，其餘為ge 產品。
二． 高壓預裝柱：
tosoh產品：a*b表示內徑為a（mm），高為b（mm）
原本1kpsi=145mpa，但akta系統（幫浦和管道）不適合耐受太高壓力。
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