如何延長色譜柱的使用壽命

2022-12-17 10:57:04 字數 1989 閱讀 7561

色譜柱的使用壽命,除了與所分析的樣品和流動相及使用頻率有關係外,最主要的是與日常的委會密切相關。為延長色譜柱的使用壽命,維護您的利益,請仔細閱讀此部分。色譜柱的使用壽命主要是分局柱效和柱壓兩個指標來衡量,如果一支色譜柱柱效太低或柱壓太高,通常被認為該色譜柱已經結束。

因此,延長色譜柱使用壽命的關鍵是,消除引起柱效下降和柱壓公升高的因素。以下是色譜柱的日常維護方法:

一、流動相的ph應在使用的範圍內

welch公司的色譜柱除反相氰基柱ph1.5-9.0外,其反相色譜柱的ph範圍均為1.

5-10,由於填料中存在si-c和si-o鍵,流動相超過其ph範圍將會導致矽膠基質流失和鍵合相碳鏈斷裂,使柱效下降,使用壽命變短。由於流動相的ph控制不當而對色譜柱造成的損害,通常很難是色譜柱恢復,因此必須認真對待,嚴格控制流動相的ph值。

二、去除樣品和流動相中的固體顆粒

樣品和流動相中含有的固體顆粒物質會堵塞色譜柱篩板,篩板被堵住不僅會引起柱壓的公升高,而且也會引起柱效下降,因為篩板的堵塞會引起液流不均,導致色譜峰型拖尾、變寬,從而使柱效下降。因此,建議使用超純水和色譜純試劑,在分析樣品前對樣品進行針筒過濾,流動相過0.45μm濾膜。

三、使用保護柱或**過濾器

樣品和流動相經過濾後並不能完全消除固體顆粒物質,因為幫浦的磨損、密封圈和管路的老化也會產生固體顆粒物質,這些固體顆粒被流動相帶入色譜柱,堵塞篩板,導致柱壓公升高、柱效下降。保護柱和**過濾器上都有篩板,其孔徑與色譜柱孔徑相同,因此可以阻止固體顆粒物質到達色譜柱,有效防止色譜柱篩板的堵塞。由於柱壓公升高在分析故障中佔很大比例,因此,除對樣品和流動相進行過濾外,建議您在色譜柱進樣端加上保護柱或**過濾器。

如果去人色譜柱柱壓公升高是由於進樣端篩板被堵引起的,科選擇一下方式進行補救:1、先在色譜柱前加上保護柱或**過濾器,然後用甲醇、水=20/80ml/min反向衝色譜柱180min。

2、先在色譜柱進樣端加上保護柱或**過濾器,然後反向使用。

四、正確使用緩衝鹽

緩衝鹽通常易溶於水,難溶於有機溶劑,因此緩衝鹽使用不當會使其析出,堵塞填料基質上的微孔和顆粒間的空隙,使填料板結,柱壓上公升;同時阻礙了基質上鍵合的碳鏈自由舒展,使色譜柱的保留能力下降,柱效降低。緩衝鹽析出後,去除非常困難,因此,正確的使用緩衝鹽對延長色譜柱使用壽命非常重要。

正確使用緩衝鹽的目的是防止緩衝鹽析出,因此正確使用緩衝鹽的方法可歸結為一句話:使用前要過濾,使用後要沖洗。具體方法如下:

1、等度條件:使用緩衝鹽前和使用後需用過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min;使用後去除緩衝鹽的另乙個方法是用過渡流動相以0.

2ml/min流速沖洗色譜柱過夜。2、梯度條件:用含有緩衝鹽的流動相跑梯度之前,用與初始流動相組成相同的過渡流動相以1.

0ml/min流速沖洗60min,再用該過渡流動相以1.0ml/min沖洗色譜柱120min。含緩衝鹽流動相的梯度設定應盡量平緩,以避免梯度過程中緩衝鹽析出。

注意:過渡流動相是指有機相和水相的組成與分析流動相相同,區別只是過渡流動相不含緩衝鹽。

3、緩衝鹽析出的補救方法:

1)方案1:用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35攝氏度條件下反向沖洗色譜柱120min2)方案2:

用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向沖洗色譜柱過夜。

五、防止強保留物質在色譜柱上存留

強保留物質和大分子化合物在色譜柱中累積,對樣品中的化合物產生額外的保留行為,不僅引起峰型變寬、拖尾,使柱效下降,同時也會引起保留時間的變化,累積到一定

程度時還會導致柱壓公升高。由於強保留物質和大分子化合物對色譜分離的影響是乙個累積效應,需要一定的時間才會體現出來,但對許多藥品特別是複雜樣品而言,很難判斷其是否是含有強保留物質,因此要防止強保留物質的累積,需要在每天的日常維護中用純甲醇或乙氰清洗色譜柱。清洗方法:

1、未使用緩衝鹽:每天分析完成後,先用上述方法除去緩衝鹽,然後再用甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min。

2、使用過緩衝鹽:分析完成後,先用上述方法除去緩衝鹽,然後在用純甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min3、補救方法:

水——乙氰——氯仿(或異丙醇)——乙氰——水每一步以1.0ml/min流速反向沖洗色譜柱60min。

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