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1、目的：
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依據gb/t4789.2—2010食品衛生微生物學檢驗菌落總數測定檢驗規程，規範操作者的檢驗方
法，保證測定結果的準確性。
2、適用範圍：
本標準規定了菌落總數檢驗方法，本標準適用於各類食品菌落總數的測定。
3、責任：使操作者熟悉本規程，並在具體檢驗中嚴格遵照操作，確保檢測結果準確。4、裝置和材料（除微生物實驗室常規滅菌培養裝置外，其它裝置和材料如下：
）4.1恆溫培養箱：36℃±1℃，42℃±1℃。
4.2冰箱：2℃～5℃。
4.3恆溫水浴箱：46℃±1℃。4.4電子天平：感量0.1g。
4.5均質器。
4.6振盪器。
4.7無菌吸管：1ml(具0.01ml刻度)、10ml、（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸頭。
4.8無菌錐形瓶：容量250ml、500ml。4.9無菌培養皿：直徑90mm。
4.10 ph計或ph比色管或精密ph試紙。
tm4.11放大鏡或（和）菌落總數器或petrifilm自動判讀儀。5、培養基和試劑
5.1平板計數瓊脂培養基5.2磷酸鹽緩衝液
5.3無菌生理鹽水：稱取8.5g氯化鈉溶於1000ml蒸餾水中，121℃高壓滅菌15min。
6、檢驗程式見圖17.1操作步驟
7.1.1固體和半固體樣品：
稱取25g樣品置盛有225ml磷酸鹽緩衝液或生理鹽水的無菌均質杯內，8000r/min～1000r/min均質1min～2min，或放入盛有225ml稀釋液的無菌均質袋中，用拍擊式均質器拍打1min～2min，製成1：10的樣品勻液。
7.1.2液體樣品：以無菌吸管吸取25ml樣品置盛有225ml磷酸鹽緩衝液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，製成1：10的樣品勻液。
7.1.3用1ml無菌吸管或吸頭（尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管換用一支無菌吸管反覆吹打打其混合均勻，製成1：100的樣品勻液。
7.1.4按以上操作程式，製備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增一次，換用一次1ml無菌吸管或吸頭。
7.1.5根據對樣品汙染狀況的估計，選擇2個～3個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進行10倍遞增稀釋時，每個稀釋度分別吸取1ml樣品液加入兩個無菌平皿內。同時
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分別取1ml稀釋液加入兩個無菌平皿作空白對照。
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7.1.6及時將15ml～20ml冷卻至46℃的平板計數瓊脂培養基（可放置於46℃±1℃恆溫水浴箱中保溫）傾注平皿，並轉動平皿混合均勻。
7.2增菌
7.2.1瓊脂凝固後，將平板翻轉，36℃±1℃培養48h±2h。
水產品30℃±1℃培養72h±3h。7.2.
2如果樣品中可能含有在瓊脂培養基表面瀰漫生長的菌落時，可在凝固後的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養基（約4ml）,凝固後翻轉平板，按以上條件進行培養。
7.3菌落計數
可用肉眼觀察，必要時用放大鏡或菌落計數器，記錄稀釋倍數和相應的菌落數量。菌落計數以菌落開成單位（colony-forming units,cfu）表示。
7.3.1選取菌落數在30cfu～300cfu之間、無蔓廷菌落生長的平板計數菌落總數量。
低於30cfu的平板記錄具體菌落數，大於300的可記錄為多不可計。每個稀釋度的的菌落數應採用兩個平板的平均數。
7.3.2其中乙個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜採用，而應以無片狀菌落生長的平板作該稀釋度的菌落數；若片狀菌落不到平板的一半，而其餘一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板後乘以2，代表乙個平板菌落數。
7.3.2當平板上出現菌落間無明顯界線的鏈狀生長時，則將每條鏈作為乙個菌落計數。
8、結果表述
8.1菌落總數的計算方法
8.1.1若只有乙個稀釋度平板上的菌落數在適宜計數範圍內，計算兩個平板菌數的平均值，再將平均值乘以相應稀釋倍數，作為每克（或毫公升）中菌落總數結果。
8.1.2若有兩個連續稀釋度的平板菌落數在適宜計數範圍內時，按以下公試計算
n=∑c/(n1+0.1n2)d式中：
n—--樣品中菌落數；
∑c—平板（含適宜範圍菌落數的平板）菌落數之和；n1---第乙個適宜稀釋度平板上的菌落數n2----第二個適宜稀釋度平板上的菌落數d-----稀釋因子（第一稀釋度）。
8.1.3若所有稀釋度的平板上菌落數均大於300，則對稀釋度最高的平板進行計數，其他平板可記錄為多不可計，結果按平均菌落數乘以最高稀釋倍數計算。
8.1.4若所有稀釋度的平板菌落數均小於30，則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。
8.1.5若所有稀釋度（包括液體樣品原液）平板均無菌落生長，則以上於1乘以最低稀釋倍數計算。
8.1.6若所有稀釋度的平板菌落數均不在30～300之間，其中一部分小於30或大於300時，則以最接近30或300的平均菌數乘以稀釋倍數計算。8.2菌落總數的報告
8.2.1菌落數在100以內時，按「四捨五入」原則修約，採用兩位有效數字報告。
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菌落總數檢驗作業指導書
8.2.2大於或等於100時，第三位數字採用「四捨五入」原則修定後，以前兩位數字，後面用0代替位數；也可用10的指數形式來表示，按「四捨五入」原則修約後，採用兩位有效數字。
8.2.3若所有平板上為蔓廷菌落而無法計數，則報告菌落蔓廷。8.2.4若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結果無效。
8.2.5稱重取樣以cfu/g為單位報告，體積取樣以cfu/ml為單位報告。
菌落總數檢驗程式：
檢樣25g (25ml)樣品±225ml稀釋液，均質
10倍系列稀釋
選擇2個—3個適宜樣品勻液，各取1ml分別加入無菌培養皿內
每皿中加入15ml—20ml平板計數瓊脂培養基，渴勻
培養計算各平板菌落數計算菌落總數
報告圖1
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