複雜性疾病的分子診斷

幾乎所有慢性粒細胞白血病(cml)患者都有染色體異常，屬於染色體移位：t(9;22)(q34;q11)，其發病的分子機制是產生bcr/abl融合基因。

臨床上以細胞學作為常規診斷方法，另外還可以用螢光原位雜交技術（fish）和逆轉錄-pcr技術（rt-pcr）檢測bcr/abl融合基因。請你簡述用fish和rt-pcr兩種方法診斷慢性粒細胞白血病(cml)時各自的優缺點。

慢性粒細胞白血病：是一種獲得性造血幹細胞惡性轉殖性增生疾病。病程進展慢，臨床以脾腫大、粒細胞顯著增多、外周血及骨髓**現大量中幼、晚幼粒細胞為特徵。

患者有慢性期、加速期、最終急性變期。

fish和rt-pcr兩種方法診斷慢性粒細胞白血病(cml)時各自的優缺點

1、fish是通過根據已知的基因序列合成探針，並分別標上不同的螢光。這個探針就可以根據基因的序列去尋找它在染色體上的位置，並與之結合。由於每條探針上標記很多個螢光分子，在螢光顯微鏡下就可以看到明亮的訊號。

如果兩個基因分別標上紅色和綠色螢光，如果兩個基因跑到一起去了（形成了融合基因），紅色和綠色螢光跑到一起，就變成了黃色的螢光（即融合訊號）。

a、要做常規的fish檢測，需要先確定檢測的目的，選擇不同基因的探針，並且只能對特定的基因進行分析。

b、一般的fish檢測需要指定基因特異性的探針，相對於染色體核型分析來說，可以更精確和更精細地對基因進行定位分析，但失去了核型分析的巨集觀性。

c、fish對基因或融合基因的擴增也能較好地檢測。

d、fish檢測一般最多和分析1000個細胞的螢光訊號，檢測靈敏度較核型分析高。

e、敏感性更高，但是裝置要求高，費用高，而且發現不了可能存在的其它異常核型。

2、 pcr ：bcr-abl1融合基因雖然從核型分析上都是ph染色體，看起來一樣。但bcr-abl1基因序列也有多種，而且從基因序列水平來看有很大差異。

但bcr-abl1融合基因的序列相對固定並有其規律，我們已經熟知了常見型bcr-abl1融合基因的序列，因此可以根據基因序列設計相應的方案進行檢測。

a、它的優勢有：可以對多至百萬個細胞進行檢測，甚至發現一百萬個細胞裡的乙個腫瘤細胞。是目前檢測靈敏度最高的方法，適合進行微量腫瘤細胞殘留的檢測。

b、不需要細胞培養或雜交過程，報告速度快。

c、但特定的基因檢測方案，只能對特定的基因異常進行檢測。如果只對初治或**的cml患者進行bcr-abl1的檢測，只能知道bcr-abl1融合基因的資訊，而不能知到是否有其它附加的染色體異常，而後者是有一定預後意義的。

d、尤其對於初治或**的cml患者，pcr檢測並不能代替核型分析。

e、由於pcr方法只能檢測很小範圍內的基因序列，如果基因序列發生變異，可能會導致pcr檢測的失敗，從而導致假陰性，因此對實驗室的質量控制要求很高，而裝置要求不太高，為了提高檢測結果的正確性，最好是在檢測技術穩定、可靠的實驗室進行。