1.2.2總黃酮含量的測定
2.1 10%和 70%乙醇提取液 400.0 ul置於試管中，依次加入 2.
0 ml蒸餾水和 0.3 ml 5% nano2，混合振盪 5min 後，加入 0.3 ml 10%alcl3，混合振盪 1min 後，加入 2.
0 ml 1mol/l naoh，充分混合後，在 510 nm 下測定反應液的吸光值 a，以不加樣品溶液的為空白對照。總黃酮化合物的含量以兒茶素(catechin, ce)為標準品標定。總黃酮含量(ce mg/g dw) = (c×v2) / (v1×m×1000)
其中，c 為兒茶素的濃度(mg/ml)，v1 為吸採樣品溶液的體積(ml)，v2 為提取液的體積(ml)，a為樣品的吸光值，m 為黑枸杞果實材料的幹物質重量(g)。
1.2.3總酚類含量的測定
採用福林酚(folin-ciocalteu)試劑法測定總酚類化合物的含量，參考beato等和康霞等的測定方法。具體步驟為：吸取1.
2.1 70%乙醇提取液50.0 μl置於試管中，依次加入2.
0 ml 10% folin-ciocalteu和 1.0ml 7.5% na2co3，混合振盪5min後，置於水浴鍋中37 °c下避光反應1 h，取出在760 nm下測定反應液的吸光值a，以不加樣品溶液的為空白對照。
總酚類化合物的含量以沒食子酸(gallic acid, gae)為標準品標定。採用福林酚(folin-ciocalteu)試劑法測定總酚類化合物的含量，參考beato等[7]和康霞等的測定方法。具體步驟為：
吸取 1.2.1 70%乙醇提取液 50.
0 μl 置於試管中，依次加入 2.0 ml 10% folin-ciocalteu和 1.0ml 7.
5% na2co3，混合振盪 5min 後，置於水浴鍋中 37 °c 下避光反應 1 h，取出在 760 nm 下測定反應液的吸光值 a，以不加樣品溶液的為空白對照。總酚類化合物的含量以沒食子酸(gallicacid, gae)為標準品標定。
總酚含量(gae mg/g dw) = (c×v2) / (v1×m*1000)
其中，c 為沒食子酸的濃度(mg/ml)，v1為吸採樣品溶液的體積(ml)，v2為提取液的體積(ml)，a為樣品的吸光值，m 為黑枸杞果實材料的幹物質重量(g)。
1.2.4抗氧化能力的測定
為了更為準確、全面地反映提取液的總抗氧化能力，分別採用較為廣泛應用的 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, ***h)和鐵離子還原/氧化能力(ferric reducing/antioxidant power,frap)兩種測定方法[8-11]。
1）***h法參考nencini等[12]和li等[13]的方法測定。具體步驟為：吸取1.
2.1 10%和70%乙醇提取液加20.0 μl，加到提前製備好的7.
0 ml 10-4mol/l ***h 甲醇溶液中，室溫黑暗振盪反應30 min，取出在 515 nm 下測定反應液的吸光值a（以不加樣品溶液的參比對照，吸光值a0；以70%無水乙醇為空白對照）。以500 μmol/l 90% 抗壞血酸的甲醇溶液為陽性對照。樣品溶液的抗氧化能力計算方法為：
抑制率(inhibition percentage, i%) = [(a0－a)/ a0] ×100；其中，a 為樣品溶液的吸光值，a0不加樣品溶液的吸光值。
2） frap 法參考 li 等[13]、benzie 和 strain[15]的方法測定。具體步驟為：吸取 1.
2.1 中 10%和 70%乙醇提取液 20.0 ul，依次加入 5.
0 ml 蒸餾水和提前製備好的 4.0 ml frap 溶液中(要求現配現用，配製方法為：取 10 倍體積的乙酸鹽緩衝液，ph 3.
6；1 體積 10 mmol/l 2,4,6-三(2-吡啶基)三嗪[2,4,6-tris(2-pyridyl)-s-triazine, tptz]的 40 mmol/l hcl溶解液，1 體積的 20 mmol/l fecl3·6h2o，三者混合均勻)，水浴鍋中 37 °c 反應 4 min 後，取出在 593 nm 下測定反應液的吸光值 a（以不加樣品溶液為參比對照，吸光值 a0；以 70%無水乙醇為空白對照），以 500 μmol/l 抗壞血酸 90%甲醇溶液為陽性對照。樣品溶液的抗氧化能力以 500 μmol/l fe2+ (feso4·7h2o) 為參比基礎，計算公式為：
frap 值 (μmol/l) = [(a－a0)/ (afeso4·7h2o－a0)] × 500 (μmol/l)；其中樣品溶液的吸光值， afeso4·7h2o為 feso4·7h2o 溶液的吸光值，a0不加樣品溶液的吸光值。
1.3 統計與分析
每個實驗重複 3 次，採用 microsoft office excel 2010 軟體進行資料處理與統計分析。
2 結果與分析
2.1黑枸杞成熟果實總黃酮、酚類的含量
如圖為成熟黑枸杞果實中總黃酮類（圖 1）和總酚類（圖 2）的含量。由圖1可知，黑枸杞在10%乙醇提取液中總黃酮量幾乎一樣，在70%的乙醇提取液中總黃酮含量波動較大，初步推測是實驗誤差所致。此外在70%乙醇提取液中總黃酮量微高於10%。
由圖2可知，10%和70%乙醇提取液中總酚的含量幾乎一樣。
圖1 黑枸杞中總黃酮含量圖2 黑枸杞中總酚含量
2.2黑枸杞黑枸杞提取液的抗氧化能力
圖3和圖4結果顯示，在利用***h和frap法測得的10%和70%乙醇提取液抗氧化能力結果中，隨著時間的推移，黑枸杞提取液的抗氧化女人哪能力幾乎無明顯變化，同時黑枸杞70%乙醇提取液的抗氧化能力均分別高於10%乙醇提取液。
圖3 ***h法圖4 frap法
3 小結
1）根據實驗資料統計及影象對比，黑枸杞在10%乙醇提取液中總黃酮量幾乎一樣，在70%的乙醇提取液中總黃酮含量波動較大，初步推測是實驗誤差所致。此外在70%乙醇提取液中總黃酮量微高於10%。由圖2可知，10%和70%乙醇提取液中總酚的含量幾乎一樣。
2）根據實驗資料統計及影象對比，在利用***h和frap法測得的10%和70%乙醇提取液抗氧化能力結果中，隨著時間的推移，黑枸杞提取液的抗氧化女人哪能力幾乎無明顯變化，同時黑枸杞70%乙醇提取液的抗氧化能力均分別高於10%乙醇提取液。
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