過柱消化液的配置，每柱需消化液30μl。
rq1 rnase-free dnase(promega cat#m6101) 2-5μl（根據dna量多少，1μl可以消化1μg的rna）
rq1 dnase 10×reaction buffer3μl
rnase-free watertotal to 30μl
步驟：從第一次上柱開始，其他步驟請參見說明書。
6. 加入1倍體積70％乙醇（請先檢查是否已加入無水乙醇!），顛倒混勻（此時可能會出現沉澱）。
得到的溶液和可能沉澱一起轉入吸附柱ra中（溶液太多可分次過柱，吸附柱最多可以放700μl溶液，吸附柱套在收集管內）。
7．10,000rpm 離心45秒，棄掉廢液，將吸附柱重新套**集管。
9．加入500μl漂洗液rw（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000 rpm 離心60秒，棄掉廢液。
11．將吸附柱ra放回空收集管中，12,000 rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制酶消化反應。
12. 加入已配置好的消化液30μl於吸附膜的中間部位，37℃保溫30分鐘。
13．加入500μl 去蛋白液re，室溫放置2分鐘，12,000rpm 離心45秒，棄掉廢液。
14．加入500μl漂洗液rw，12,000 rpm 離心60秒，棄掉廢液。
15．重複步驟14。
16．將吸附柱ra放回空收集管中，12,000 rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。
12．取出吸附柱ra，放入乙個rnase-free離心管中，根據預期rna產量在吸附膜的中間部位加50-80μl rnase-free water（事先在 65-70℃水浴中加熱效果更好）， 室溫放置2分鐘，12,000 rpm 離心1分鐘。如果需要較多rna，可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，離心1分鐘, 或者另外再加30μl rnase-free water，離心1分鐘，合併兩次洗脫液。
洗脫體積越大，洗脫效率越高，如果需要rna濃度較高，可以適當減少洗脫體積， 但是最小體積最好不少於30μl，體積過小降低rna洗脫效率，減少rna產量。
過柱子我的經驗總結
照方抓藥式 過柱子經驗總結 1 選柱子 現在見到的柱子徑高比一般在1 5 10。2 稱量 00 300目矽膠，稱30 70倍於上樣量 如果極難分，也可以用100倍量的矽膠書中寫矽膠量是樣品量的30 40倍，具體的選擇要具體分析。如果所需組分和雜質分的比較開 是指在所需組分rf在0.2 0.4，雜質相...
過柱子我的經驗總結
照方抓藥式 過柱子經驗總結 1 選柱子 現在見到的柱子徑高比一般在1 5 10。2 稱量 00 300目矽膠，稱30 70倍於上樣量 如果極難分，也可以用100倍量的矽膠書中寫矽膠量是樣品量的30 40倍，具體的選擇要具體分析。如果所需組分和雜質分的比較開 是指在所需組分rf在0.2 0.4，雜質相...
過柱子我的經驗總結
swrl20041219據網路資源整理支援小木蟲 1 選柱子 現在見到的柱子徑高比一般在1 5 10。2 稱量 100 300目矽膠，稱30 70倍於上樣量 如果極難分，也可以用100倍量的矽膠書中寫矽膠量是樣品量的30 40倍，具體的選擇要具體分析。如果所需組分和雜質分的比較開 是指在所需組分rf...