改良tja培養基雙層瓊脂培養法
分離（1）配製bcg牛乳培養基，分裝三角瓶，包紮，滅菌備用。
bcg牛乳培養基配製
a溶液：脫脂乳粉100g,水500ml，加入1.6%溴甲苯酚綠（bcg）乙醇溶液1ml，80℃滅菌20min。
（1.6%溴甲苯酚綠（bcg）乙醇溶液用1.6g溴甲酚綠加入20ml無水乙醇中，再加水至100ml製成）,121℃濕熱滅菌20min。
b溶液：酵母膏10g，水500ml，瓊脂20g，ph6.8，121℃濕熱滅菌20min。
以滅菌操作趁熱將a溶液和b溶液混合均勻後倒平板。
（2）樣品的處理
按照無菌操作要求，從市售新鮮酸乳中吸取10ml檢樣，放入裝有90ml無菌水的三角瓶內，振搖混勻。
（3）分離方法
①倒培養基
在無菌室，先用紫外線照射半小時把表面菌滅了，在通風10min後，每培養皿傾注約15ml左右已溶化的bcg牛乳培養基，立即放在桌上搖勻，冷卻凝固後即成平板。
②十倍稀釋法
將檢樣充分搖勻後，用十倍稀釋法稀釋成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5各種稀釋度的樣品液。
③分離直接用接種環蘸取10-3,10-4、兩個稀釋度的試管中原液，在bcg牛乳培養基瓊脂平板上劃線分離，每稀釋度做兩個平皿。置40℃培養箱中培養48h。如出現圓形稍扁平的黃色菌落及周圍培養基變為黃色者初步定為乳酸菌。
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