4 製備梯度培養皿
取10ml 牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基於直徑9cm的培養皿中，立即將培養皿斜放，使高處的培養基正好位於皿邊與皿底的交接處。待凝固後，將培養皿平放，在加入含有鏈黴素（100μg/ml）的牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基10ml。待凝固後，便得到鏈黴素從到0逐漸遞減的濃度梯度培養皿。
然後在皿底做乙個「↑」符號標記。
5 塗佈菌液
將增殖後的菌液進行離心（3500r/min，10min），棄去上清液，再加入少量生理鹽水（約0.2ml），製成濃的菌液後將全部菌液塗佈於梯度培養皿上，並將它倒置於37℃恆溫箱中培養24h，然後將出現於高藥物濃度區內的單菌落分別接種到斜面上，經培養後再做抗藥性測定。
6 抗藥性測定
（1）製備含藥平板：取鏈黴素溶液（750μg/ml）0.2、0.
4、0.6、0.8ml，分別加到無菌培養皿中，再加入融化並冷卻到50℃左右的牛肉膏蛋白腖培養基15ml，立即混勻，平置凝固後即成乙個對照平板（不含藥物）。
（2）抗藥性的測定：將上述每個皿底的外面用記號筆畫成8等分，並註明1~8號，然後將若干抗藥菌株逐個劃在上述4種濃度的藥物平板上和對照平板上。每一皿必須留一格接種出發菌株。
然後將所有的培養皿倒置於37℃恆溫箱中培養過夜。第二天觀察各菌株的生長情況，並記錄結果。
【結果記錄】
將各菌株抗藥性測定結果記錄於下表中。
注：以「+」表示生長，「-」表示不生長。
結果：你選到抗藥菌株株，最高抗藥性達g/ml。
【注意事項】：
1 製備含藥平板時，務必使藥物與培養基充分混勻。
2 嚴格無菌操作，勿將含藥平板上的雜菌誤認為是抗藥性大腸埃希氏菌。
【思考題】：
1 未經誘變的菌株在含藥平板上是否有菌落出現？為什麼？
2 你選出的抗藥性菌株中，如有一支抗鏈黴素的菌株在含藥平板上能生長，在不含藥平板上反而不生長，這說明什麼？
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