1 目的：dna抽提標準化操作規範適用於hla試驗中的dna抽提操作。
2 適用範圍：dna抽提實驗室
3 依據： dna抽提標準化操作規範
4 引用檔案：德國bag公司（以下簡稱bag） 《instructions for use extra-gene i》
5 程式
5.1試劑準備
5.1.1 bag® extra-gene i
該試劑盒包括3部分：solution 1 、solution 2、solution 3
使用前，若solution 2有沉澱請將其在37℃孵育，直至沉澱完全溶解
5.1.2 乙醇溶液，濃度（v/v）為96%或100％
5.1.3 乙醇溶液，濃度（v/v）為70%
5.1.4 滅菌蒸餾水，按照滅菌蒸餾水配製標準操作規範
5.2儀器及用具準備
5.2.1 移液器，規格：20µl – 200µl、200µl – 1000µl
5.2.2 移液器配套吸頭，規格：200µl和1000µl，滅菌、無dna/rna殘留
5.2.3 eppendorf離心管，規格：1.5ml 或2.0 ml ，滅菌
5.2.4 混勻器
5.2.5 離心機（至少13，000 rpm，）
5.2.6 水浴箱
5.2.7 dna濃度測定儀（dna單位為ng/µl，可提供a260/280）
5.2.8 試管架（每排24孔）
5.2.9 手套規格：乳膠手套，與操作者手形相適應，經滅菌
5.3操作步驟：
5.3.1 換工作服、戴手套
5.3.1.1 從工作服衣櫃中換取專用工作服，戴上適應自己手形的乳膠手套。
5.3.2 血樣檢查
5.3.2.1 血樣應在-20℃儲存，儲存時間不應超過1年，無溶血、血樣儲存容器無破裂、無滲漏、容器蓋子無鬆動等現象。
5.3.2.2 核對血樣記錄與捐獻者記錄，確定血樣是否有效，只有有效捐獻者記錄的血樣才能用於試驗。
5.3.2.3 血樣量至少1 ml。
5.3.2.4 選取滿足以上要求的24個血樣作為一組抽提標本。
5.3.2.5 若血樣本是凍存的，請將血樣在室溫下孵育至其完全解凍。
5.3.3 dna抽提
5.3.3.1 將選取的24個血樣按照編號的順序依次放置在試管架上，每排12個，共2排。在記錄本上按順序記錄樣品號、抽提日期、抽提者等。
5.3.3.2 取24個1.5mleppendorf離心管，依次放置在試管架上，每排12個，共2排，與血樣一一對應，並在離心管上用油性記號筆標上對應血樣的號碼。
5.3.3.
3 向每個離心管中加入500µl --600µledta或檸檬酸抗凝血（新鮮或凍存），要求抗凝血充分混勻，不見固體懸浮物。用加樣器反覆吹吸血液，注意吸取血液時要求緩緩吸入，不要過快，以免血液進入加樣器中，汙染加樣器。取900µl solution 1加入到每管中，蓋緊離心管蓋子（要防止手套汙染蓋子內壁），充分混勻混合液，不見固體懸浮物。
8000rpm 離心1分鐘，從離心機中取出離心管，依血樣順序放置離心管於試管架上。
5.3.3.4 小心倒去上清液，棄之，注意不要將沉澱倒出，離心管口向下倒置在吸水紙上5秒鐘，使剩餘液體流出。
5.3.5 向每管中加入1000µl solution 1, 振盪混勻，使細胞沉澱打散懸浮，放置1—2分鐘。
8000rpm 離心1 分鐘。小心倒去上清液，如同5.3.
3.。5.3.3.6 此時管中沉澱應為灰白色，如果細胞沉澱仍為紅色，需重複5.3.3.5 。
5.3.3.
7 每管加入240µl蒸餾水，振盪混勻，務必使細胞沉澱完全打散懸浮；再加入120µl solution 2, 用混勻器充分混勻，直至沉澱完全溶解。每管加入120µl solution 3, 反覆顛倒離心管，室溫下孵育5--10分鐘（可以適當延長孵育時間），孵育時偶爾搖勻反應管，直至產生白色絮狀。 13000rpm離心5分鐘，重新取24個1.
5ml離心管，並依次標上對應的血樣號碼，依次放置在試管架上。
5.3.3.
8 小心將含有可溶性dna的上清液轉倒入對應樣本號的空離心管中，不要攪動沉澱；每管再加入120µl solution 3，反覆顛倒離心管，室溫下孵育5-10分鐘，13000rpm離心5分鐘。
5.3.3.
9 重新取24個1.5ml離心管，並依次標上對應的樣本號碼，依次放置在試管架上。小心將含有可溶性dna的上清液轉倒入對應樣本號的空離心管中，不要攪動沉澱。
5.3.3.10 向每管加入1ml 96％乙醇，輕輕上下翻轉離心管以混合均勻，室溫放置5分鐘，可見到白色絮狀dna沉澱。13000rpm 離心2分鐘。
5.3.3.
11 小心棄去上清液，注意不要倒掉dna沉澱，將離心管口向下倒置在吸附物上，使剩餘乙醇流出。再向每管中加入1ml 70%乙醇，反覆倒置離心管。13000離心2分鐘。
5.3.3.12 小心棄去上清液，注意不要倒掉dna沉澱。
5.3.3.13 沉澱物為白色，開啟反應管，放置10分鐘，揮發殘留的乙醇，乾燥dna；
或者用一次性的滅菌棉籤吸乾反應管中的乙醇，注意不要把白色沉澱帶出。
5.3.3.14 每管加入300ul 蒸餾水，在56℃孵育10分鐘。
5.3.4 dna濃度的測定
5.3.4.1 開啟dna濃度測定儀開關，儀器自檢通過。
5.3.4.2 具體測量步驟參見各型號儀器說明書。
5.3.4.
3 在樣本dna濃度記錄單上記錄日期、樣品號碼、濃度和a260/a280等資訊。濃度測定過程中要求不同樣品間更換槍頭，防止交叉汙染。如果a260/a280>2 表示有rna的汙染；如果a260/a280<1.
6 則表示有蛋白質的存在。要求a260/a280在1.6—2.
0之間。濃度要求在10ng/ul以上才可進行擴增。
5.3.4.4 測完所有樣品後，將dna濃度記錄單的樣本號與對應的裝有dna的離心管上的樣本號進行核對，保證無誤後，放入冷藏冰箱或擴增。
5.3.4.5 將比色皿重複5.3.4.2操作後，放入儲存液中儲存。關上dna濃度測定儀開關，蓋上防塵套。
5.3.5 dna抽提記錄的複核
應該有2人檢查血樣記錄、裝有dna離心管上樣本號和dna濃度記錄單上樣本號，核對其一致性，有問題應該立即查詢問題原因。
5.3.6 dna的貯存：貯存於-20℃，注意蓋緊離心管蓋子
5.3.7 血樣的歸還： 歸還已經抽提後的血樣。
6 抽提流程
安全標準化操作規程清單
1 加油操作規程 2 進貨驗收 計量 操作規程 3 卸油操作規程 4 發電機操作規程 加油操作規程 1.站立迎候。加油員應站在加油島靠近入口一側面向車輛進入方向迎接顧客。2.引導車輛。當車輛駛向站內時，加油員應迅速判斷車輛的油箱位置和應加油品品種，五指併攏，抬起手臂引導車輛到所需的加油位停泊，在5秒...
安全生產標準化安全操作規程
1.目的 為認真貫徹 安全第一，預防為主，綜合治理 的方針，根據 安全生產法 和國家 省 市有關規定，結合公司生產工藝，減少因違章作業引發的生產安全事故，特制定本制度。2.範圍 企業生產和輔助生產現場的作業崗位。3.內容 3.1 裝配鉗工安全操作規程 3.1.1 使用銼刀 刮刀 鏨子 扁鏟等工具，不...
安全生產標準化安全操作規程
九 安全操作規程目錄 一 通用機械安全操作規程 1 加工工件時，必紮緊袖口，束緊衣襟。嚴禁戴手套 圍巾或敞開衣服操作旋轉工具機。2 檢查裝置上的防護裝置是否完好和關閉。保險 聯鎖 訊號裝置必須靈敏 可靠，否則不准開動。3 工件 夾具 工具 刀具必須裝卡牢固。4 開車前要觀察周圍動態，有妨礙運轉 傳動...