SDS PAGE原理及配方

2021-07-04 14:00:16 字數 734 閱讀 2430

1) 根據目的蛋白的分子量大小選擇合適的凝膠濃度,再按照下面的**配製sds-page的分離膠(即下層膠):

1) 按照如下**配製sds-page的濃縮膠(也稱堆積膠、積層膠或上層膠):

tbst 緩衝液

每2l體積中含:

1) 抗體去除液

每50ml抗體去除液中含:

sds-page電泳的基本原理:

sds-聚丙烯醯胺凝膠電泳,是在聚丙烯醯胺凝膠系統中引進sds(十二烷基硫酸鈉),sds會與變性的多肽,並使蛋白帶負電荷,由於多肽結合sds的量幾乎總是與多肽的分子量成正比而與其序列無關,因此sds多肽複合物在丙稀醯胺凝膠電泳中的遷移率只與多肽的大小有關,在達到飽和的狀態下,每克多肽可與1.4g去汙劑結合。當分子量在15kd到200kd之間時,蛋白質的遷移率和分子量的對數呈線性關係,符合下式:

logmw=k-bx,式中:mw為分子量,x為遷移率,k、b均為常數,若將已知分子量的標準蛋白質的遷移率對分子量對數作圖,可獲得一條標準曲線,未知蛋白質在相同條件下進行電泳,根據它的電泳遷移率即可在標準曲線上求得分子量。

制膠緩衝液:濃縮膠選擇ph6.7,分離膠選擇ph8.9,選擇tris-hcl系統,具體作用後面介紹;

temed與ap:促凝作用,加速聚丙烯醯胺的凝固;

ap中含有29的丙烯醯胺和1的甲叉基聚丙烯醯胺,能產生自由氧基,使丙烯醯胺聚合。

十二烷基硫酸鈉(sds):陽離子去汙劑,作用有四:去蛋白質電荷、解離蛋白質之間的氫鍵、取消蛋白分子內的疏水作用、去多肽摺疊。

SDS PAGE試劑配方

30 凝膠貯液 150ml,4 儲存 29.2 acr 43.8g 0.8 bis 1.2g 將acr完全溶解於120ml水中,再加入bis使其完全溶解,加ddh2o定容至150ml,用濾紙過濾溶液,4 儲存。分離膠buffer 1.5m tris hcl 250ml tris 45.4725g s...

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