常見細菌感染PCR鑑定流程

2021-03-11 17:49:36 字數 1084 閱讀 6915

一、細菌核酸的提取

1.取1 ml培養肉湯13000 g離心10 min棄去上清。

2.用1 ml蒸餾水洗滌細胞沉澱後再次13000 g離心10 min棄去上清。

3.取200 ul instagene matrix(bio-rad)重懸細胞顆粒。

(注):採用平板培養時挑取單個菌落直接用200 ul instagene matrix(bio-rad)混勻後從第4步開始。

4.56℃溫育30 min後劇烈振盪10 s。

5.95℃溫育1 min後劇烈振盪10 s。

6.13000 g離心10 min,上清即可用於pcr。

二、pcr反應液的配置

takara taq酶(目錄號:dr001a),包裝內含有10×pcr buffer(已新增鎂離子)、dntp mixture及6×loading buffer。

三、擴增引物和反應條件

四、電泳檢測pcr結果

50×tae緩衝液:

242 g tris、57.1 ml冰乙酸、100 ml 0.5 mol/l edta(ph 8.0),加去離子水至1 l。

1.根據電泳槽大小取50×tae緩衝液稀釋50倍配製1×tae緩衝液使用。

2.根據制膠模具大小稱取合適量的低熔點瓊脂糖凝膠製備1%濃度的瓊脂糖凝膠(即100 ml 1×tae緩衝液中加入1 g低熔點瓊脂糖)。

3.微波加熱2~3min至瓊脂糖完全熔化。

4.稍事冷卻後加入溴化乙錠至終濃度0.5 ug/ml,混勻後倒入制膠模具中,插上制膠梳至冷卻凝固。

5.拔出制膠梳,在電泳槽內倒入合適量的1×tae緩衝液。

6.取6×loading buffer與pcr產物按1:5的比例(即2 ul的6×loading buffer與10 ul的pcr產物比例)混勻,加入指定的瓊脂糖凝膠加樣孔中,並在其附近加樣孔中加入5 ul的marker(雙鏈核酸大小指示物,在本操作流程中用takara dl1000即可)。

7.關上電泳槽,接好電極,根據電泳槽陽極與陰極之間的距離設定電壓(1~5v/cm),核酸應向陽極(紅色插頭方向)泳動。

8.待溴酚藍指示劑遷移至適當距離時停止電泳,關閉電源,將瓊脂糖凝膠放置凝膠成像儀內紫外燈下觀察產物的片段大小和擴增情況。

細菌感染時抗生素的選擇

病原菌化膿性鏈球菌 a組 選擇的藥物青黴素 供選方案 克林黴素 大環內酯類 頭孢類 備註克林黴素是青黴素過敏患者最可靠的公選方案 肺炎鏈球菌 青黴素 阿莫西林大環內酯類 頭孢類 多西環 素糞腸球菌 氨苄西林 慶大黴素 屎腸球菌 萬古黴素 慶大黴素 葡萄球菌 金葡菌 表葡菌 耐甲氧西林葡萄球菌類白喉菌...

人類最易感染細菌的十大地方

一 廚房水龍頭 廚房水龍頭尾端的金屬濾片會降低水流量,對環境有益,但對你的健康則否。水流會保持過濾片潮濕,是細菌滋生最理想的環境。由於自來水並未經過無菌消毒,如果不小心以骯髒的手指或食物碰觸到,細菌就可以在水龍頭內生長。隨著時間流逝,累積的細菌愈來愈多,在濾片上形成所謂的生物膜。最後,生物膜甚至可能...

C反應蛋白在診斷新生兒細菌性感染中價值

摘要 目的 c反應蛋白在診斷新生兒細菌 染中的價值。方法 測定150例發生細菌感染的新生兒 感染組 與50例非感染組新生兒 未感染組 血c反應蛋白 crp 水平。結果 感染組 crp值為 11.36 2.36 mg l,明顯高於未感染組 1.25 0.82 mg l,感染組與未感染組比較差異有統計學...