9. 加入50 μl預熱(60℃)的洗脫緩衝液，室溫放置3分鐘。12000 rpm離心2分鐘，流下的液體即為基因組dna。
10. 電泳。取3 μl溶液電泳檢測質量。
（二）pcr擴增
1. 根據已發表的16s rdna序列設計保守的擴增引物。
16s (f) 5'-agagtttgatcctggctcag-3'
16s (r) 5'-ggttaccttgttacgactt-3'
2. pcr擴增體系：
在0.2 ml eppendorf管中加入1μl dna，再加入以下反應混合液：
16s (f1μl (10μm)
16s (r1μl (10μm)
10×pcr buffer 5 μl
dntp4 μl
taq酶0.5 μl
加ddh2o使反應體系調至50 μl，簡單離心混勻。
3. pcr反應
將eppendorf管放入pcr儀，蓋好蓋子，調好擴增條件。擴增條件為：
943 min
9430 sec
5045 sec 35 cycles
72100 sec
727 min
4. pcr產物的電泳檢測
拿出eppendorf管，從中取出5 μl反應產物，加入1μl上樣緩衝液，混勻。點入預先製備好的1%的瓊脂糖凝膠中。電泳1 hr。在紫外燈下檢測擴增結果。
（三）擴增片段的**
根據上步實驗結果，如果擴增產物為唯一條帶，可直接**產物。否則從瓊脂糖凝膠中切割核酸條帶，並**目的片段。
1）稱量一2 ml.的eppendorf管質量，記錄。
2）在紫外燈下切割含目的條帶的凝膠，放入2 ml的eppendorf管內，稱量。計算凝膠質量。
3）每100 mg凝膠加入100 μl binding buffer，混勻。60℃溫育至凝膠融化
4）全部轉入uniq-10柱中。10000 rpm離心1分鐘，倒去收集管內的液體。
5）加入500 μl binding buffer，10000 rpm離心1分鐘，倒去收集管內的液體。
6）加入70％乙醇（wash solution），10000 rpm離心0.5分鐘。
7）再10000 rpm離心2分鐘徹底甩乾乙醇。吸附柱轉移到乙個新的1.5ml的離心管。
8）加入30 μl預熱的洗脫緩衝液，室溫放置3分鐘。12000 rpm離心2分鐘，流下的液體即為**的dn**段。
（四）dn**段測序
將**的片段送至生物公司測序，測序引物為16s pcr引物。
四、實驗結果及分析
根據測序結果，到ncbi上進行比對，確定該未知菌的種屬。
(根據比對結果進行進化樹的繪製。寫明所用軟體及大致的分析方法。
分析討論實驗的過程及結果。
細菌分子鑑定
三 瓊脂糖凝膠電泳檢測pcr產物 1 配置用於灌注電泳槽和製備凝膠所需的電泳tae緩衝液 2 按體積稱取1 w v 的瓊脂糖，加tae緩衝液 3 在微波爐中加熱至瓊脂糖完全溶解 4 冷卻至60 左右，加入eb溶液，使之終濃度為0.5ug ml 5 將溶液倒入膠膜中，插入膠疏，靜置冷卻 6 待凝膠完全...
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4.細菌染色體dna的快速提取 取1.5 ml離心管，稱重。在管中加入100 l緩衝液i，從平板上刮數環菌於其中，振盪均勻，9 000r min,3min。棄上清液，稱重，計算出菌體質量。按照每毫克菌體10 l的比例，在離心管中加入緩衝液 將菌體振盪均勻，放置於75 反應15min得到染色體dna粗...
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