分子生物學

2023-01-24 19:36:02 字數 5364 閱讀 7721

第二章:

基因組:細胞或生物體中一套完整的單倍體的遺傳物質的總和。

基因:。

操縱子:幾個功能上相關的結構基因串聯在一起,連同其上游的調控區及其下游的轉錄終止資訊所構成的基因表達單位。

多順反子:幾個基因先轉錄到一條mrna鏈上,然後在分別翻譯成各自的蛋白。

類核結構:細菌染色體彩細胞內形成乙個緻密區域稱類核。

質粒:是獨立於細菌細胞內染色體以外能自主複製的共價閉合環狀dna。

不相容性:同一類群的不同質粒通常不能在同一菌株內穩定共存,當細胞**時就會分別進入不同的自帶細胞,這種現象叫做質粒的——

重疊基因:指基因組dna中某些序列被兩個或兩個以上的基因所共用,又稱基因重疊。

多基因家族:指由某一祖先基因經過重複和變異所產生的一組基因。

假基因:在多基因家族中,某些成員並不產生有功能的基因產物,這些基因稱為——

端粒:線性染色體末端都存在的一種由蛋白和基因組成的特殊結構稱——

端粒酶:是一種核醣蛋白酶,具有反轉錄活性,其本質是可催化端粒延長的rna-pr複合物。

基因病:當基因突變改變了基因的編碼序列,導致基因功能發生異常由此引起的疾病。

限制性片段長度多型性:用一種限制性核酸內切酶消化同種生物的不同個體的基因組中某段序列時,會呈現不同的消化片段形成或生物群體的多型性,這種多型性稱——

原核生物基因組的結構特點有哪些?

一條dna分子組成;只有乙個複製起始位點;具有類核結構(支架蛋白、dna、rna);具有操縱子;結構基因常為單拷貝;無基因重疊現象;同工酶基因;編碼區佔基因組50%;

存在複製序列;存在可移動的dna序列。

質粒的生物學特性?

質粒的主要成分:出酵母殺傷治理為rna分子外,所有已知質粒都是環狀超螺旋dna分子,分子量在4*106-1*108d;質粒的轉移:分子量在2.

5*107d以上的質粒有轉移能力,可以在同一種屬性的菌體內轉移,也可以在不同種屬的菌體間轉移,使某些質粒在致病菌中播散,形成多重耐藥株。質粒的複製:主要由質粒的四個遺傳控制系統決定,複製調控系統;分配系統;細胞**控制系統;位點特異重組系統。

質粒帶有選擇性標記。如氨苄青黴素抗性基因。質粒有不相容性:

——何為轉座因子,其型別有哪些?轉位可產生哪些遺傳效應?

轉座因子:又稱轉座元件,是一類在細菌染色體,質粒或噬菌體之間自行移動並具有轉位特性的獨立的dna序列。型別:

插入序列;轉座子;可轉座的噬菌體。遺傳效應:引起突變;引入新的基因;基因重排。

病毒基因組的一般特性?

基因組大小在1.5*103-3.6*106bp之間;基因組的核酸型別:

有雙鏈dna,單練dna,雙鏈rna,單鏈rna,有環狀分子,也有線性分子,一種病毒顆粒中核酸成分只能為一種,或為dna或rna,形式多種多樣;基因組中有基因重疊現象;基因組中具有操縱子;病毒基因可連續也可間斷;基因組中重複序列少;基因組中非編碼區少;基因組是單倍體;相關基因集群;病毒基因組含有不規則結構基因。

常見的dna及rna病毒有哪些?

dna:sv40病毒基因組;腺病毒基因組;B型肝炎測定病毒基因組

rna:C型肝炎病毒基因組;人類免疫缺陷病病毒基因組

真核生物基因組的特徵是什麼?

基因組分為細胞核基因組和細胞質基因組;單順販子;斷裂基因;重複序列;多基因家族與假基因;多型性;基因重疊;端粒;存在轉座子。

端粒的組成及其作用?

組成:由dn**段和蛋白質組成。作用:維持染色體的穩定性,防止染色體重排,斷裂,融合;保證線性dna完整複製;端粒的長度隨細胞的**而不斷縮短,決定著細胞的壽命。

常見的染色體結構異常有哪些型別?

缺失;形成環狀染色體;等臂染色體;倒位;易位;雙著絲粒染色體;插入;重排。

基因突變的型別?

靜態突變:點突變:錯義突變,同義突變,異碼突變,無義突變;大片段突變:缺失,插入,重排。

動態突變:三聯體重複序列。

真核生物基因組與原核生物基因組及病毒基因組之間有什麼區別?(真+原+病)

真核生物的基因重組是指一套完整單倍體dna(染色體dna)與線粒體dna的全部序列,22+x,y共24條。

質粒按功能分為f質粒,r質粒,col質粒。

一種病毒顆粒中核酸成分只能為一種,或為dna,或為rna,形式多種多樣。

真核生物基因組dna是5』-ttaggg-3』長度8-14kb,端粒的dna是由(ttgggg)n組成的非編碼重複序列。

人類基因組計畫的主要研究成果體現在遺傳圖譜,物理圖譜,序列圖譜,基因圖譜4張圖譜上。

類核結構包括dna環,rna和支架蛋白。

第三章:

蛋白質組:是指一種基因組所表達的全套蛋白質。

蛋白質組學:是指應用各種技術手段研究蛋白質組的一門新興科學。

蛋白質組學研究的範疇和常用技術?

範疇:研究生物體全套蛋白質的組成,結構,功能。技術:鹽析,等電點沉澱,有機溶劑沉澱,電泳,透析。

蛋白質-蛋白質相互作用的形式?

蛋白質亞基的聚合;交叉,聚合;分子識別;分子的自我裝配;多酶複合體。

蛋白質互相作用的研究方法?

酵母雙雜交系統;噬菌體展示;生物感測晶元質譜;蛋白質工程的定點誘變技術。

蛋白質-核酸:凝膠滯後實驗;濾膜結合法;甲基化干擾實驗;dnase足紋分析;其他方法

第四章:

癌基因:是一類能控制細胞生長,並能促進細胞惡性轉化的基因。包括病毒癌基因和細胞癌基因。

病毒癌基因(n-onc)是一類存在於病毒中,能使敏感宿主產生腫瘤或是體外培養細胞轉化的基因。

細胞癌基因(c-onc)是正常細胞中一類編碼關鍵性調控蛋白的基因,又稱原癌基因。

抑制癌基因:是存在與正常細胞內的一類可抑制細胞過度生長與增生的基因有潛在抑癌作用(隱性癌基因)。

病毒癌基因與細胞癌基因的區別和聯絡?

區別:病毒癌基因是病毒基因組中特殊的核苷酸序列,是一類存在於病毒中,能使宿主產生腫瘤或體外培養細胞轉化的基因;細胞癌基因是存在於正常細胞中一類編碼關鍵性調控蛋白的基因,在正常情況下處於靜止或地表達狀態,在細胞正常生長,發育,分化過程中具有重要生理功能,在異常表達時,可使正常細胞發生轉化而導致腫瘤的發生。聯絡:

兩隻均是癌基因,具有潛在誘導細胞惡性轉化的特性。

描述原癌基因啟用途徑有哪些(啟用機制)?

原癌基因點突變,即單個鹼基突變;原癌基因獲得外援啟動子而啟用;原癌基因甲基化程度降低而啟用;原癌基因的擴增,基因拷貝數增加,產物過量表達;染色體易位或基因重排;基因耦聯。

如何理解腫瘤發生學說(腫瘤發生各階段及表現)?

啟動階段:在啟動因子作用下,細胞的dna分子已發生改變,但表型仍顯示正常。促癌階段:

表型正常而dna已發生變化的癌前細胞,在啟動因子和促癌因子的協同作用下,細胞表現出癌細胞特徵。轉化階段:是細胞惡變的終末階段,即已惡變的細胞進入自主**增生狀態,促癌階段形成的增生性病灶全進一步浸潤轉移。

第五章:

核酸分離純化的總原則?

1、保證核酸一級結構的完整性:盡量簡化操作步驟縮短提取時間;緩衝液的酸度控制在ph4.0-10.

0之間;核酸提取常在0-4℃的條件下進行;防止核酸酶的汙染及核酸的生物降解。2、盡量排除其他分子的汙染,保證核酸樣品的純度。應去除的汙染物主要包括:

非核酸大分子汙染物主要包括蛋白,多醣哈爾之類物質等;非需要的核酸分子,是指製備dna時,rna內汙染物,製備rna時,dna為汙染物;至於在核酸分離純化過程中加入的有機溶劑和某些金屬離子,由於對後續實驗有影響,往往需要良好地去除。

核酸分離純化的技術路線的設計?

核酸的釋放(破碎細胞常用溶胞法);核酸的分離與純化;核酸的濃縮、沉澱與洗滌。

如何鑑定分離純化後的核酸是否達到後繼實驗研究的要求?

1、濃度鑑定:紫外分光光度法:是基於核酸分子中的鹼基具有一定的紫外線吸收特徵,最大吸收波為260nm。

在波長260nm的紫外線下,a=1時的光密度大約相當於40ug/ml的單鏈dna或單鏈rna,33ug/ml的單鏈寡聚核苷酸。此法只適用於此定濃度大於0.25ug/ml的核醣溶液;螢光光度法:

核酸具有嵌入螢光燃料的特性,螢光強度積分與核酸含量成正比,靈敏度可達1-5ng,適合低濃度核酸溶液的定量分析。2、純度鑑定:紫外可見光度法:

通過a260與a280的比值來判斷有無蛋白質的汙染。純dna的a260/a280比值為1.8,純rna的a260/a280比值為2.

0,比值公升高與降低均表示不純;螢光光度法:用eb等螢光染料示蹤的核酸電泳結構可判定核酸的純度。純dna的分子量較rna大,跑得慢,位於加樣孔附近,rna電遊後可呈現特徵性的3條帶。

3、完整性鑑定:凝膠電泳法:以eb為示蹤染料的核酸凝膠電泳結構可用於判定核酸的完整性。

dna:完整:分子量大電泳慢,在加樣孔附近;降解:

呈拖尾狀表明有小分子dna降解。rna:完整:

3條帶的螢光強度積分呈特定的比值,分子量大,遷移率低,螢光強度積分高:真核:28srrna的螢光強度為18srrna的2倍;原核23srrna的螢光強度為16srrna的2倍;降解:

螢光強度積分比非2倍關係。

怎樣保證rna樣品的完整性?

避免細胞外rnase的汙染:應選擇乙個潔淨的實驗室進行操作;操作者必須戴口罩與手套;嚴格選擇與控制實驗用的試劑與器材;在冰浴條件下操作。抑制細胞內rnase的活性並極力地去除rnase:

使用蛋白變性劑;去汙染;rnase特異性控制;使用還原劑。

核酸的儲存?

dna:於te緩衝液中在-70℃可儲存數年。te緩衝液的ph為8.

0時,可以減少dna的脫氨反應,低溫條件有利於減少dna分子的各種反應。rna:rna可溶於0.

3mol/l的醋酸鈉溶液或雙蒸水中,在-70~-80℃儲存。rna沉澱溶於70%的乙醇溶液或去離子的甲醯胺溶液中,可在-20℃中長期儲存。

酚抽提法的過程,所用試劑及各試劑的作用?

過程:破碎細胞釋放核酸,消化蛋白;核酸的沉澱和洗滌。試劑:

1、裂解緩衝液:edta可抑制dna酶的活性,同時降低細胞膜的穩定性;sds主要引起細胞膜的降解並能乳化脂質和蛋白質,並使它們沉澱,同時還有降解dna酶和細胞中的蛋白質;2、ph8.0的tris飽和酚分氯仿重複抽選dna,酚:

氯仿=1:1。酚:

是蛋白質變性沉澱,抑制dna酶活性;tris溶液(ph8.0)。保證抽提後dna進入水相,避免滯留於蛋白質層;氯仿:

加速有機相、水相分層,萃取脂類去除痕量酚;重複抽提,提高dna純度。3、0.1倍體積的nh4ac加2倍體積的無水乙醇沉澱;70%乙醇洗滌。

柱層析法的原理及過程?

柱層析作用原理是在多鹽條件下,依靠dna與矽機制的可逆性結合進行純化。過程:吸附:

多鹽造成磷酸二酯骨架的脫水,通過暴露的磷酸鹽殘基,使dna吸附到矽膠質上;洗滌:以50%的乙醇溶液洗去rna和醣類等生物大分子;洗脫:加入te緩衝液或水溶液使dna分子重新水合,並通過離心洗脫出來。

質粒的3種構型?

閉環質粒dna,半開環質粒dna,線形質粒dna。

dna純化的方法包括透析、層析、電泳及選擇性沉澱。

核酸沉澱常用的鹽類有醋酸鈉、醋酸鉀、醋酸銨、nacl、kcl、mgcl2等,常用的有機溶劑為乙醇、異丙醇和聚乙二醇。

分子生物學

清道夫細胞 處理氧化修飾了的膽固醇,不具備膽固醇轉化作用,最終導致膽固醇細胞破裂。2 逆轉錄 以病毒rna為模板,指導含有全部病毒資訊的dna合成過程。3 細胞凋亡 在基因程式性控制下有別於細胞壞死的一種,有規律的自我消亡。4 dna的c值 同種生物基因組dna含量是恆定的,乙個單倍體基因組中的dn...

分子生物學

第一章緒論 一 dna的發現 1928年英國科學家griffith等人發現肺炎鏈球菌使小鼠死亡的原因是引起肺炎。首先用實驗證明基因就是dna分子的是美國著名的微生物學家 ery。1952年,美國冷泉港卡耐基遺傳學實驗室科學家hershey和他的學生chase從事噬菌體侵染細菌的實驗。二 分子生物學簡...

分子生物學

一 名詞解釋 1 基因 能夠表達和產生蛋白質和rna的dna序列,是決定遺傳性狀的功能單位。2 基因組 細胞或生物體的一套完整單倍體的遺傳物質的總和。3 端粒 以線性染色體形式存在的真核基因組dna末端都有一種特殊的結構叫端粒。該結構是一段dna序列和蛋白質形成的一種複合體,僅在真核細胞染色體末端存...