(agarose gel electrophoresis)
目的和要求
學習和掌握瓊脂糖凝膠電泳的原理和基本操作
實驗原理
1. 瓊脂糖凝膠電泳是最常用的鑑定dna的方法，基本原理與蛋白質電泳相似：簡便易行，只需少量dna
2. 瓊脂糖是一種天然聚合長鏈狀分子，可形成具有剛性的濾孔，凝膠孔徑的大小決定於瓊脂糖的濃度
3. dna分子在瓊脂糖凝膠中泳動時具有電荷效應與分子篩效應，遷移速率與其相對分子質量的對數反相關
4. 瓊脂糖凝膠中的dna可利用螢光染料goodview染色並在在紫外燈照射下觀察
主要試劑和器材
一、試劑
50ⅹtae緩衝液(ph8)； 凝膠上樣緩衝液(0.2%溴酚藍，50%蔗糖)
goodview (溴化乙錠eb替代物)； 瓊脂糖
二、器材
電泳儀、水平電泳槽、紫外檢測儀
基本操作方法
1. 瓊脂糖凝膠製備：
稱取0.45g瓊脂糖，放入錐形瓶中，加入30ml tae緩衝液，保鮮膜封口，置微波爐加熱至完全澄清透明取出搖勻(瓊脂糖濃度為1.5%)；
待凝膠溶液冷卻至50℃(不燙手)，加入3ml goodview (終濃度0.5g/ml)
2. 凝膠板製備：
用製膠器將紫外透光凝膠盤固定好，採用水平儀調整平衡使凝膠盤位於同一水平面；
將適宜的梳子垂直架在凝膠盤內槽的一端；
將冷卻至50℃的瓊脂糖凝膠緩緩倒入凝膠盤內槽，厚度適宜(不要有氣泡)
3. 點樣：
待凝膠凝固後，小心取出梳齒，將凝膠盤放入電泳槽內，加入足夠的tae電泳緩衝液，使液面略高出凝膠面；
取5微公升pcr擴增產物，向其中加入1微公升的上樣緩衝液，混勻後用移液器將其加入加樣孔，記錄樣品點樣次序與點樣量
4. 電泳：
接通電泳槽與電泳儀的電源，調節電壓90v，當溴酚藍染料移動到距凝膠前沿1-2cm處，停止電泳
5. 觀察：
在紫外燈下觀察凝膠，有dna處應顯出螢光條帶，記錄電泳結果
注意事項：
1. 倒膠時把握好膠的溫度，不要高於60℃ ，否則溫度太高會使凝膠盤變形
2. 膠一定要凝固好才能拔梳子，方向一定要豎直向上，不要弄壞點樣孔
3. 點樣時槍頭下伸，點樣孔內不能有氣泡
思考題dna在電場中的遷移率取決於哪些因素？
瓊脂糖凝膠電泳
農學院生態學系劉文學號 2011205017 一 實驗名稱 二 實驗目的 掌握瓊脂糖凝膠電泳的原理，用於分離和純化dn 段。三 實驗原理 在ph值為8.0 8.3時，核酸分子鹼基幾乎不解離，磷酸全部解離，核酸分子帶負電，在電泳時向正極移動。採用適當濃度的凝膠介質作為電泳支援物，在分子篩的作用下，使分...
PCR反應及瓊脂糖電泳實驗報告
2 瓊脂糖凝膠電泳 dna在電廠作用下，可以由電源的負極向正極泳動，泳動的速度與dn 段的長度成負相關，與電壓強度成正比，因此可以分離不同長度的dna。在有dna marker 不同已知鹼基對大小的dn 段的混合物 的條件下，由於不同鹼基大小的dn 段在瓊脂糖凝膠上湧動的速度不同，因此電泳完畢後會出...