農學院生態學系劉文學號：2011205017
一、實驗名稱
二、實驗目的
掌握瓊脂糖凝膠電泳的原理，用於分離和純化dn**段。
三、實驗原理
在ph值為8.0～8.3時，核酸分子鹼基幾乎不解離，磷酸全部解離，核酸分子帶負電，在電泳時向正極移動。
採用適當濃度的凝膠介質作為電泳支援物，在分子篩的作用下，使分子大小和構象不同的核酸分子泳動率出現較大的差異，從而達到分離核酸片段檢測其大小的目的。核酸分子中嵌入螢光染料(如eb)後，在紫外燈下可觀察到核酸片段所在的位置。
四、實驗器材與用具
土壤dna，5×tae緩衝液，瓊脂糖粉，錐形瓶，電爐，移液槍及槍頭，凝膠灌製平台，凝膠樣品梳，直流電源等。
五、實驗步驟
1. 5×tae緩衝液稀釋10倍，配製成0.5×tae工作液待用；
2.稱0.8g瓊脂糖粉，置於200 ml錐形瓶，加100 ml 0.5×tae稀釋緩衝液；
3. 用電爐加熱至瓊脂糖全部熔化，稍涼後加入5μl eb或其替代物；
4. 將膠槽置於水平支援物上，插上樣品梳子；
5. 將冷卻至60℃左右的膠液緩緩倒入膠槽中（注意不要產生氣泡），膠的厚度約4~6mm；
6. 待膠完全凝固後撥出梳子（注意不要損傷梳子底部的凝膠）；
7. 將膠槽置入電泳槽中，向槽內加入0.5×tbe至液面恰好沒過膠板上表面；
8. 用微量移液器取5μl dna樣品與1μl（6倍）載樣緩衝液混勻；
9. 取混合物小心加入樣品孔中，同時取dna分子量標準溶液λdna作為對照，加入相鄰樣品孔中；
10. 加完樣後，合上電泳槽蓋，立即接通電源(控制電壓保持在5~10v/cm兩電極之間的距離)(注意：上樣到開始電泳的時間不宜過長, 因為先上的樣品中dna會發生擴散，從而影響電泳效果)；
11. 當溴酚藍條帶移動到距凝膠前沿約2cm時(約需45分鐘)，關閉電源，停止電泳；
12. 取出電泳膠板，在凝膠成像系統或紫外觀察儀上觀察和照相。
六、實驗結果
(左起：marker、樹木1、樹木2、菜園1、菜園2、樹木2、菜園1、菜園2)
七、注意事項
1.瓊脂糖凝膠的濃度直接影響dn**段的分離效果，一定要根據被分離的片段大小確定合適的瓊脂糖凝膠濃度。
2.在電爐上加熱瓊脂糖一定要充分，保證其完全溶化，時間過長會導致液體蒸發。 3．熔化後的瓊脂糖凝膠一定要冷卻至室溫才能灌注。
4．待凝膠完全凝固才可進行電泳，否則電泳後的dna條帶會扭曲變形。
具有極強的致癌性，配製和使用過程中要特別小心，所有操作均只能在專門的電泳區域操作。也可用核酸染料來代替溴化乙錠，使實驗更為安全。 6.
加樣進膠時不要形成氣泡，需在凝膠液未凝固之前及時清除。
瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA
agarose gel electrophoresis 目的和要求 學習和掌握瓊脂糖凝膠電泳的原理和基本操作 實驗原理 1.瓊脂糖凝膠電泳是最常用的鑑定dna的方法，基本原理與蛋白質電泳相似 簡便易行，只需少量dna 2.瓊脂糖是一種天然聚合長鏈狀分子，可形成具有剛性的濾孔，凝膠孔徑的大小決定於瓊脂...
PCR反應及瓊脂糖電泳實驗報告
2 瓊脂糖凝膠電泳 dna在電廠作用下，可以由電源的負極向正極泳動，泳動的速度與dn 段的長度成負相關，與電壓強度成正比，因此可以分離不同長度的dna。在有dna marker 不同已知鹼基對大小的dn 段的混合物 的條件下，由於不同鹼基大小的dn 段在瓊脂糖凝膠上湧動的速度不同，因此電泳完畢後會出...