準備:新買來的試劑盒中wizard sv wash solution(洗脫液)需要新增95%的乙醇,然後做上標記。
65℃水浴nuchlease-free water
1、 用1*pbs洗一遍細胞
2、 加150微公升的wizard sv lysis buffer 到已經洗過的細胞中,用移液器將其混勻
3、 準備wizard sv集合管,將收集柱子放到收集管上,編上號
4、 把整個樣品轉移到wizard sv柱子上。
5、 將含有樣品的柱子放到離心機上,13000g離心3分鐘,如果柱子上還有殘留樣品,可以再13000g離心1分鐘.
6、 倒掉收集管中的溶液,把柱子放到集合管上
7、 再驗證wizard sv wash solution(洗脫液)中是否新增了95%的乙醇
8、 每個柱子中新增650微公升wizard sv wash solution(洗脫液),13000g離心1分鐘
9、 倒掉集合管中的溶液,把柱子重新放到空的集合管中
10、 再重新5-7步三次(一共洗4次)
11、 清空集合管,13000g再離心2分鐘,
12、 每250ul的nuchlease-free water新增2微公升的rna酶洗脫柱子中的dna,室溫孵育10分鐘、
13、 將集合管出掉,放在1.5ml的離心管中,新增250ulnuchlease-free water(提前加熱到65℃)室溫孵育2分鐘,13000g離心一分鐘
14、 將產物放於-20℃和-70℃儲存
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