人白細胞介素-10（il-10）酶聯免疫分析（elisa）
試劑盒使用說明書
廈門慧嘉生物科技****
本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用於測定人血清，血漿及相關液體樣本中白細胞介素10（il-10）的含量。
實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人白細胞介素-10（il-10）水平。用純化的人白細胞介素-10抗體包被微孔板，製成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白細胞介素-10，再與hrp標記的羊抗人抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體複合物，經過徹底洗滌後加底物tmb顯色。tmb在hrp酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成最終的黃色。
顏色的深淺和樣品中的白細胞介素-10（il-10）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（od值），通過標準曲線計算樣品中人白細胞介素-10（il-10）含量。
試劑盒組成：
樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，儲存過程中如出現沉澱，應再次離心。
2. 血漿：應根據標本的要求選擇edta或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘後，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。
仔細收集上清，儲存過程中如有沉澱形成，應該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，儲存過程中如有沉澱形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。
離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用pbs（ph7.
2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反覆凍融，以使細胞破壞並放出細胞內成份。
離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。儲存過程中如有沉澱形成，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本後，稱取重量。
加入一定量的pbs，ph7.4。用液氮迅速冷凍儲存備用。
標本融化後仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的pbs（ph7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。
離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝後乙份待檢測，其餘冷凍備用。
6. 標本採集後盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放於-20℃儲存，但應避免反覆凍融.
7. 不能檢測含nan3的樣品，因nan3抑制辣根過氧化物酶的（hrp）活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在第
一、第二孔中分別加標準品100μl，然後在第
一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然後從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第
三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第
五、第六孔中，再在第
五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻後從第
五、第六孔中各取50μl分別加到第
七、第八孔中，再在第
七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻後從第
七、第八孔中分別取50μl加到第
九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻後從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋後各孔加樣量都為50μl，濃度分別為240ng/l，160ng/l ，80ng/l，40ng/l，20ng/l）。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘各步操作相同）、待測樣品孔。
在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加於酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板後置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30（48t的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48t的20倍）倍稀釋後備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩乾，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍乾。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑a50μl，再加入顯色劑b50μl，輕輕**混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（od值）。 測定應在加終止液後15分鐘以內進行。
注意事項：
1． 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘後方可使用，酶標包被板開封後如未用完，板條應裝入密封袋中儲存。
2． 濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3． 各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本od值大於標準品孔第一孔的od值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）後再測定，計算時請最後乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉汙染。
6． 底物請避光儲存。
7． 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9． 本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
計算：以標準物的濃度為橫座標，od值為縱座標，
在座標紙上繪出標準曲線，根據樣品的od
值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋
倍數；或用標準物的濃度與od值計算出標
準曲線的直線回歸方程序，將樣品的od值
代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋
倍數，即為樣品的實際濃度
試劑盒效能：
1.樣品線性回歸與預期濃度相關係數r值為0.95以上。
2.批內與批見應分別小於9%和11%
檢測範圍：12.5 pg/ml-800 pg/ml
靈敏度：3.12 pg/ml
反應時間：1-5h
所需樣本體積：50-100ul
檢測波長：450 nm
發表外文文獻三篇
儲存條件及有效期：
1.試劑盒儲存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
人白細胞介素6 IL 6 ELISA試劑盒說明書
人白細胞介素6 il 6 酶聯免疫分析 elisa 試劑盒使用說明書 廈門慧嘉生物科技 本試劑僅供研究使用目的 本試劑盒用於測定人血清，細胞上清及相關液體樣本中白細胞介素6 il 6 的含量。實驗原理 本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人白細胞介素 6 il 6 水平。用純化的人白細胞介素 6 il...