一．實驗目的：
1.掌握鹼裂解法小量快速提取質粒dna的方法，提取的質粒dna可直接用於酶切，pcr擴增等。
2.學習利用水平式瓊脂糖凝脈電泳初步檢測dna的純度，構型，含量和分子量大小。
二．實驗原理：鹼變性抽提質粒dna是基於染色體dna與質粒dn結果a的變性與復性的差異而達到分離目的。在ph值高達12.
6的鹼性條件下，染色體dna的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒dna的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會完全分離，當以ph4.8的naac高鹽緩衝液去調節其ph值至中性時，變性的質粒dna又恢復原來的構型，儲存在溶液中，而染色體dna不能復性而形成纏連的網狀結構，通過離心，染色體dna與不穩定的大分子rna、蛋白質-sds複合物等一起沉澱下來而被除去。
三．實驗儀器及試劑：
1.5mlep管、高速離心機、移液槍
溶液i：50 mmol/l葡萄糖、10 mmol/l edta、25 mmol/l tris-hcl（ph 8.0）2毫克/毫公升溶菌酶
溶液ii：200 mmol/l naoh、1% sds
溶液iii：3 mol/l naac（ph4.8）溶液、te緩衝液：10 mmol/l tris-hcl、ph 7.51 mmol/l edta四．實驗步驟:
1、取1.5ml細胞培養物於1.5mlep管中，12000rpm/min離心1min，去上清液（重複一次）
2、加200μl溶液ⅰ重懸浮細胞
3、加200μl溶液ⅱ，輕輕搖勻，放置5min
4、加150μl溶液，輕輕搖勻，冰浴5min，12000rpm/min離心5min5、取上清，加入等體積氯仿，搖勻，12000rpm/min離心10min
6、去上清，加入等體積異丙醇，室溫放置5min，12000rpm/min離心10min7、70%乙醇洗滌沉澱2次，風乾
8、加20ddh2o溶解沉澱，-20℃下儲存備用
五．實驗結果：得到大腸桿菌質粒dna
pcr以及電泳實驗報告
一．實驗原理：
pcr：該技術是在模板dna、引物和四種脫氧核醣核苷酸存在下，依賴於dna聚合酶的酶促合成反應。dna聚合酶以單鏈dna為模板，借助一小段雙鏈dna來啟動合成，通過乙個或兩個人工合成的寡核苷酸引物與單鏈dna模板中的一段互補序列結合，形成部分雙鏈。
在適宜的溫度和環境下，dna聚合酶將脫氧單核苷酸加到引物3-oh末端，並以此為起始點，沿模板5→3方向延伸，合成一條新的dna互補鏈。
電泳：瓊脂糖凝膠可以用於蛋白質和核酸的電泳支援介質，尤其適合於核酸的提純、分析。如濃度為1%的瓊脂糖凝膠的孔徑對於蛋白質來說是比較大的，對蛋白質的阻礙作用較小，這時蛋白質分子大小對電泳遷移率的影響相對較小，所以適用於一些忽略蛋白質大小而只根據蛋白質天然電荷來進行分離的電泳技術，如免疫電泳、平板等電聚焦電泳等。
瓊脂糖也適合於dna、rna分子的分離、分析，由於dna、rna分子通常較大，所以在分離過程中會存在一定的摩擦阻礙作用，這時分子的大小會對電泳遷移率產生明顯影響。
二．實驗儀器及試劑：
ep管、離心機、pcr儀、電泳槽、電泳儀、移液槍、紫外透射檢測儀等dna模板、與特定dna模板結合的引物、去離子水、商業化的dna聚合酶以及緩衝液、dntp、dna螢光染料溴化乙錠、瓊脂糖凝膠
三．pcr反應體系（25μl）2×pcrmix 12.5μl引物1 1μl引物2 1μl20ddh2o 10.5μl
四．操作步驟
1、94℃預變性5min，然後94℃，30s-64℃，45s-72℃，1min迴圈7次2、94℃，30s-55℃，45s-72℃，1min迴圈23次3、72℃，10s
4、電泳檢測
五．實驗結果分析
分離不同大小的dn**段所用的最適凝膠濃度是不同的，資料見下表：
如右圖所示：實驗所用的瓊脂糖凝膠濃度為1.3%，實驗的dna條帶位置在500bp-750bp之間，接近500bp，證明實驗是成功的
2000bp1000bp
750bp500bp250bp100bp
實驗組對照組
核酸的酚抽提實驗報告
4.酶解液 200mmol l nacl,20mmol l tris cl ph8.0 50mmol l edta ph8.0 200 g ml蛋白酶k，1 sds。5.無dna酶的rna酶 將胰rna酶溶於10mmol l tris cl ph7.5 15mmol l nacl溶液中，濃度10mg...
DNA抽提標準化操作規程
1 目的 dna抽提標準化操作規範適用於hla試驗中的dna抽提操作。2 適用範圍 dna抽提實驗室 3 依據 dna抽提標準化操作規範 4 引用檔案 德國bag公司 以下簡稱bag instructions for use extra gene i 5 程式 5.1試劑準備 5.1.1 bag e...
質粒DNA的提取 定量 酶切與PCR鑑定實驗報告
一 實驗目的 1.學習並掌握用鹼裂解法提取質粒dna的方法 2.學習並掌握了解質粒酶切鑑定的方法 3.學習並掌握紫外吸收檢測dna濃度和純度的原理和方法 4.學習並掌握pcr基因擴增的實驗原理和操作方法 5.學習並掌握水平式瓊脂糖凝膠電泳的原理和使用方法。二 實驗原理 1.pcr 多聚酶鏈式反應 在...