FISH操作步驟

2022-10-05 03:57:02 字數 889 閱讀 7807

樣品的預處理:

1. 取反應泥水混合物2ml(可視mlss的量來決定所取樣的多少)至離心管

2. 離心(10000r/min),5min,去上清液,加入1pbs緩衝液1ml重懸,重複操作兩次

3. 加入1ml4%的多聚甲醛溶液重懸,放置於4攝氏度固體2小時

4. 樣品離心(10000r/min),5min,去上清液

5. 再加入1pbs緩衝液1ml離心(10000r/min),5min,洗去多餘的多聚甲醛溶液,重複操作三次

6. 加入0.5ml1pbs緩衝液,加0.5 ml無水乙醇,搖勻,-20度儲存,此樣品最多可儲存6個月

樣品在玻片上的固定

1. 取3微公升預處理後的樣品塗於直徑為5mm凹槽的玻片上,室溫下乾燥

2. 將乾燥好的玻片依次放於50%、80%、98%乙醇溶液中各3min進行細胞的脫水,取出後風乾。

3. 取2ml雜交緩衝液遍布在雜交管內摺好的吸水紙上,目的是讓樣品在雜交過程中始終處於緩衝溶液的潮濕環境裡,將已經固定好樣品的載玻片放入雜交管中,然後在46度中放置數分鐘

4. 事先將帶有螢光標記的探針用無菌水配置成25ng/l的溶液並分裝,實驗前取分裝好的探針溶液與雜交緩衝液按照體積比1:8混合成探針使用液,用錫箔紙包好放入46度預熱數分鐘

5. 取9l預熱後的探針使用液塗於載玻片凹槽中樣品上,然後將載玻片迅速移回雜交管中於46度下雜交(黑暗中進行),雜交2-3小時

6. 雜交後的洗脫,開啟恆溫水浴槽,加熱到48度,將10ml的雜交緩衝液和50ml的淋洗緩衝液進行預熱。雜交完成後取出玻片用雜交緩衝液沖洗樣品後,快速放入淋洗緩衝液中,48度水浴20min後用4度超純水洗掉玻片上多餘鹽分,立即風乾。

7. dapi染色每個凹槽塗上9ldapi,4度暗處5min,4度超純水沖洗掉多餘的dapi,風乾

8. 塗封片劑,蓋蓋玻片

操作步驟參考

1.對正文進行排版,其中 1 章名使用樣式 標題1 並居中 編號格式為 第x章,其中x為自動排序。操作步驟 把游標定位在第一章前,點選 格式 選單下的 樣式和格式 在右面的 樣式和格式 窗格中右鍵點選 標題1 選擇 修改 在 修改樣式 對話方塊中選擇 居中 點選 樣式 選擇 編號 在 專案符號和編號...

LMT操作步驟

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魚操作步驟

1.新建10 14cm 分150 2.前景色 3.新建圖層 矩形選框 填充白色 4.前景色改成藍色 畫筆選 軟角 濾鏡 扭曲 波紋 色價調整不透明度 60 色相 飽和度 5.開啟 魚 拖到圖層中 6.調整 魚 圖層的色階 7.將魚突出些 使用選區將大的那只魚選出反選8.玻璃效果 濾鏡 海洋波紋 9....