百利藥業生物藥研發部
標準操作規程
題目：293t細胞傳代培養操作規程
編號：sop-m-e-003-
制定者簽名） 日期： 年月日
批准者簽名） 日期： 年月日
生效日期年月日
修改和追加記錄
題目：293t細胞培養操作規程
1 目的 293t細胞是常用於包裝和擴增病毒載體的工具細胞，因此做好293t細胞的培養，為保證相關實驗的正常進行提供必要條件。
2 適用範圍本部門293t細胞培養
3 操作方法
3.1 將移液器和移液槍、15ml離心管、離心管架、75cm2新的細胞培養瓶放於生物安全櫃中，按照生物安全櫃的標準操作規程，將生物安全櫃的紫外開啟半小時。
3.2 將含10%胎牛血清和100u/ml雙抗的dmem及pbs放於37℃水浴鍋中預熱。
3.2.1 將已長到80%-90%的293t細胞培養瓶從37℃，5%的co2培養箱中取出，先用75%的酒精噴灑於瓶表面，將細胞培養瓶旋轉放於生物安全櫃中，用無菌的移液管吸淨其中的培養基，加5ml的預熱的pbs洗滌一次，吸淨pbs。
3.2.2 將含edta-0.
25%tyption用pbs稀釋兩陪到五倍，向該75cm2的細胞瓶中加入3ml稀釋好的edta-0.25%tyption，讓其充分平鋪於細胞表面。蓋好瓶蓋，將細胞瓶放在顯微鏡下觀察，直到細胞變圓，加含10%胎牛血清的dmem終止反應，用移液管輕輕將瓶上的細胞吹下，將細胞液移到15ml無菌的離心管中，1000rpm離心3分鐘。
3.2.3 將離心上清吸棄掉，用手指輕輕拍打離心管底將底部細胞分散開，再加3mldmem培養基將分散的細胞重懸稀釋開，取一定量的細胞液進行n倍稀釋後計數，按照細胞計數標準操作規程進行。
3.2.4 計數好之後細胞傳代密度按照2~5×104個細胞/cm2進行傳代培養，每個75cm2的培養瓶中加10mldmem培養基，放於37℃，5%的co2培養箱中培養。
3.2.5 24小時後觀察細胞狀態，待細胞長到80%-90%時進行下一次傳代培養。
常規細胞培養方法
傳代培養法 原理細胞在培養瓶長成緻密單層後，已基本上飽和，為使細胞能繼續生長，同時也將細胞數量擴大，就必須進行傳代 再培養 傳代培養也是一種將細胞種儲存下去的方法。同時也是利用培養細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經消化後才能分瓶。材料和試劑 1.細胞 貼壁細胞株 2...
細胞培養室配置
新中新藥研究開發中心 科 我中心擬建立細胞培養室，現向你處提供所需配置清單如下。請提供有關裝置的產品介紹書和 供我們選擇。一儀器裝置 1 冷凍高速離心機1臺 2 消毒櫃 50l1臺 3 超聲清洗機1臺 4 普通冰箱 冷藏4 c 冷凍 20 c1臺5 液氮罐 儲存罐 50 l2個 運輸罐 杜瓦瓶1個 ...
細胞培養注意事項
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