一、名詞解釋
1.百分吸光係數2.凝膠層析3.聚丙烯醯胺凝膠濃度(t%)4.空白管5.分配係數(kd)
6.遷移率7.電泳8.血糖9.聚丙烯醯胺凝膠交聯度(c%)10.摩爾消、吸光係數
11.標準曲線12.電滲13.內水體積(vi)14.洗脫體積(ve)15.外水體積(vo)
16.層析17.公尺氏常數(km)
二、問答題
1. 簡述分光光度法原理。
2. 簡述標準曲線的作用及繪製要點。
3. 分光光度法中為何要配製空白管?如何配製?
4.簡述分光光度法的波長選擇的原則。
5、簡述雙縮脲法和紫外法測定蛋白質濃度的原理及優缺點。
6、如何利用雙倒數作圖法求出km值。
8、簡述聚丙烯醯胺凝膠電泳高分辨的原理。
9、簡述不同ph條件下,蛋白質分子解離及在電場中泳動的狀態。
10、ldh同工酶聚丙烯醯胺凝膠電泳中,分離膠混合液至少應包括哪些主要成份?其各自作用是什麼?
11、簡述影響蛋白質電泳的因素。
12、 簡述凝膠層析的原理。
13、簡述凝膠層析分離蛋白質的原理
14、簡述sds-page測定蛋白質分子量的原理。
15、簡述等電聚焦-聚丙烯醯胺凝膠平板電泳測定蛋白質等電點的原理。(4分)
16、試述從兔子肝臟中分離dna的原理。(5分)
17、簡述在dna和rna分離與鑑定實驗中,0.14mol/l nacl、檸檬酸鈉、5%sds、氯仿、異戊醇、95%冷乙醇、10%乙酸、10%nacl的主要作用。
18、按分離機理簡述層析分類。
三、1、(1)採用兩種方法對待測γ-球蛋白溶液進行蛋白質定量分析。
bca法:標準管為50 l牛血清白蛋白(1.8mg/ml)+50 l水+2ml bca工作液,a=0.250
測定管為100 lγ-球蛋白溶液+2ml bca工作液,a=0.300
紫外分光光度法:標準管為2ml牛血清白蛋白(1.8mg/ml)+2ml生理鹽水,a=0.300
測定管為2mlγ-球蛋白溶液+2ml生理鹽水,a=0.450
分別計算兩種方法測得的γ-球蛋白溶液的濃度。(3分)
(2)這兩種蛋白質定量方法在對同一管樣品定量時,結果有很大的差別。判斷哪一種定量方法的實驗結果更加準確,說明判斷依據。(2分)
2、 取2ml肝勻漿(1g肝/2ml勻漿)分離dna和rna,(1)得到的純化dna沉澱,加0.01m naoh 2.0ml溶解,從中取0.
1ml+2.9ml0.01m naoh稀釋,用紫外分光光度法測得a260=0.
460,a280=0.240,鑑定純度,計算dna濃度(g/l)和每克肝組織中提取的dna量(g/g)。已知k(p)dna=0.
02ml/(g·cm)(2)得到的rna沉澱加蒸餾水2ml溶解,從中取0.1ml+3.9ml蒸餾水稀釋,用紫外分光光度法測得a260=0.
241,a280=0.139,鑑定純度,計算rna濃度(g/l)和每克肝組織中提取的rna量(g/g)。已知k(p)rna=0.
025ml/(g·cm)。(5分)
3. 用紫外分光光度法測定牛血清白蛋白含量時,準確吸取牛血清0.1ml,加生理鹽水9.
9ml。稀釋成待測樣本,在280nm和260nm兩處波長分別測得光密度值,a280=0.454,a260=0.
250,求牛血清白蛋白濃度(g/l)。已知牛血清白蛋白百分吸光係數=6.3(100ml/(g·cm))。
4在凝交通透層析(葡聚醣g-50)中,藍葡聚醣2000洗脫體積為8.2ml,細胞色素c的洗脫體積為14ml,dnfp-甘氨酸的洗脫體積為18.2ml,試計算該層析柱的內、外水體積及細胞色素c的分配係數。
(4分)
5、在雙縮脲法測定蛋白質含量時,將2.0ml待測血清加生理鹽水8.0ml稀釋成待測樣本,然後按下錶操作:
顯色後540nm波長比色,ods=0.382,odx=0.426,已知蛋白質標準液濃度為20 mg/ml ,試求待測血清的蛋白質濃度(g/l)。(4分)
(100ml/(g·cm))。(4分)
6、在葡萄糖氧化酶法測定血糖濃度時,按下錶操作:
顯色後505nm波長比色,ods=0.300,odx=0.220,已知葡萄糖標準液濃度為1.08 mg/ml,試求待測血漿的血糖濃度(mmol/l)。(5分)
第10頁:名解:分光光度法,摩爾消光係數知識點:空白管的用途和配製方法
第11頁:知識點:標準曲線的作用第13頁:知識點:公式cx的計算方法
第16頁:知識點:雙縮脲法原理第18頁:知識點:血糖測定原理(god法)
第24頁:名解:層析第25頁:知識點:層析分類第31頁、:名解:凝膠層析
知識點:凝膠層析的原理第32頁名解:外水體積,內水體積知識點:分配係數kd的計算
第39—41頁:名解:電泳,遷移率,電滲知識點:電泳的分類、影響電泳的因素
第44—45頁:名解:凝膠濃度、交聯度知識點:page的原理
第48頁:知識點:ldh同工酶染色的原理第82頁:知識點:km的概念和意義(意義在生化書上找)第111頁:血糖濃度和去路(在生化課本上找)
分子生物學
清道夫細胞 處理氧化修飾了的膽固醇,不具備膽固醇轉化作用,最終導致膽固醇細胞破裂。2 逆轉錄 以病毒rna為模板,指導含有全部病毒資訊的dna合成過程。3 細胞凋亡 在基因程式性控制下有別於細胞壞死的一種,有規律的自我消亡。4 dna的c值 同種生物基因組dna含量是恆定的,乙個單倍體基因組中的dn...
分子生物學
第一章緒論 一 dna的發現 1928年英國科學家griffith等人發現肺炎鏈球菌使小鼠死亡的原因是引起肺炎。首先用實驗證明基因就是dna分子的是美國著名的微生物學家 ery。1952年,美國冷泉港卡耐基遺傳學實驗室科學家hershey和他的學生chase從事噬菌體侵染細菌的實驗。二 分子生物學簡...
分子生物學
一 名詞解釋 1 基因 能夠表達和產生蛋白質和rna的dna序列,是決定遺傳性狀的功能單位。2 基因組 細胞或生物體的一套完整單倍體的遺傳物質的總和。3 端粒 以線性染色體形式存在的真核基因組dna末端都有一種特殊的結構叫端粒。該結構是一段dna序列和蛋白質形成的一種複合體,僅在真核細胞染色體末端存...