園藝植物育種學總論
實驗指導書
黃桂香編著
廣西大學農學院園藝系
2023年3月
實驗一園藝植物花粉生活力測定(3h3
（一）果樹花粉生活力測定3
（二）蔬菜花粉生活力測定6
實驗二、三園藝植物開花習性觀察及有性雜交育種(6h) ……………7
（一）果樹開花習性觀察及有性雜交育種7
（二）蔬菜開花習性觀察及有性雜交育種8
實驗四、園藝植物品種描述及鑑別(3h10
（一） 番茄品種描述及鑑別10
（二） 荔枝品種描述及鑑別13
實驗五、種胚分離培養技術(3h16
實驗六、園藝植物選擇育種(3h17
實驗七、園藝植物品種調查及育種方案的制訂(6h)……………………20
實驗八、園藝植物花粉單核期觀察(3h20
實驗一、園藝植物花粉發芽試驗及生活力測定
內容一：果樹花粉發芽試驗及花粉生活力測定
一、目的要求
練習並掌握果樹花粉發芽試驗及花粉生活力測定技術
二、材料用具
供試花粉、氯化鈣、硼酸、瓊脂、蔗糖、凹玻片、棉花、染色瓶、蒸餾水、顯微鏡、計數器、天平、載玻片、蓋玻片、燒杯、鑷子、水浴鍋、玻璃杯、玻棒、冰箱、溫箱、乾燥器等。聯苯胺、α—萘酚、碳酸鈉、酒精、過氧化氫、氯化三苯基四氮吡、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、量筒、量瓶、滴瓶等。
安全提示：因聯苯胺、α—萘酚、氯化三苯基四氮唑為易制毒化學品，操作時要按規範要求，避免人體直接接觸，注意安全。
三、說明
在有性雜交工作中，常因雜交親本組合的花期不遇，或親本植株異地而必須預先收集父本花粉，花粉應貯藏在低溫(0—4℃)，乾燥(相對濕度0—4%)不受陽光直射(或黑暗)的環境下，可以較長時間地保持花粉的生活力，經貯藏或外地採來的花粉，在授粉之前，必須檢驗花粉的生活力，以確定花粉發芽的可靠程度，這對檢驗雜交後的效果，具有重要意義。
花粉人工發芽的效果與培養基的配製是否適合有很大關係，培養基常用不同濃度的蔗糖和瓊脂1%及蒸餾水配製而成，不同果樹的花粉對蔗糖濃度要求不同。一般柑桔花粉要求蔗糖濃度以10—15%為宜；蘋果及梨以10—15%為宜，桃以10%為宜。通過控制蔗糖濃度的高低可調節培養基的滲透壓，防止播種的花粉在培養基上發生破裂現象。
培養基一般以微酸性為宜，ph值相應調整在6—5.2之間，發芽溫度控制在20—25℃，並需要空氣和較高的濕度。如在培養基中加入少量的硼酸和維生素b1，更可促進花粉發芽。
測定花粉生活力，同樣是檢查花粉的質量，因為做花粉發芽試驗時，操作較複雜，裝置要求較高，需時也較長。為了簡易而迅速地測定花粉的生活力，也有用化學染色的方法測定花粉生活力，但此種方法有乙個很大的缺點，就是不能真實地反映出有發芽力的花粉究竟有多少，因為即使染上色的花粉也不一定都具有生活力。所以一般常用而且較為可靠的方法仍然是採用花粉發芽試驗，而染色法作為一種粗略的快速測定，還是比較簡便的。
四、方法和步驟
(一)花粉發芽試驗
(1)培養基的配製：在100毫公升蒸餾水中，加入瓊脂1克，蔗糖(按果樹花粉種類不同的比例加入)和0.01g的硼酸共同置於燒杯中加熱煮沸，使瓊脂和蔗糖等充分溶解於水中，在加熱過程中，由於水分蒸發，必須加入失去的水分，才能保持準確的濃度，然後將燒杯置於水浴鍋中(或盛熱水的燒杯中)備用，以防培養基冷卻凝固
(2)發芽床的裝置：用玻棒將冷卻前(約50℃)的培養基滴入凹玻片的凹孔中(1—2滴)，要求培養基表面必須園正，待其凝固後用作播種花粉之發芽床。
(3)播種花粉用接種絲或頭髮沾上花粉(花粉事先收集使之乾燥，貯藏於乾燥器中置於冰箱內)少許，均勻地播種於培育基表面，播種時要防止花粉成團堆集於培育基上；也要防止花粉埋入培養基過深，影響花粉發芽。播種後要在顯微鏡下檢查，花粉分布是否均勻。花粉堆積過多難以計數，而過少則影響發芽。
以每一視野中（10×10）分布有100—200粒左右花粉為宜。播種完畢後，將凹玻片插入染色瓶中(染色瓶底事先放入少量的脫脂棉，並加入適量的無菌水)，蓋上瓶蓋。再在染色瓶上貼上標籤，註明花粉種類，蔗糖濃度，採集時間，播種時間，工作者姓名等。
然後置於溫箱中（溫度調至25—28℃左右）。
(4)播種後的檢查：播種根據樹種不同，隔不同時間在顯微鏡下，檢查花粉發芽情況、蘋果、梨、桃在3—4小時後檢查第一次，以後每隔2—4小時檢查一次（北方可適當縮短2次之間的時間），柑桔在24小時檢查一次。每次檢查三個視野（最好能固定視野檢查。
如不能固定視野檢查，則每次檢查的視野不能重複）。同時用計數器統計出花粉總粒數及發芽粒數，直至花粉粒數不再增加為止，花粉發芽標準，以花粉管伸長超過花粉直徑為準。
表一花粉發芽記載表
(二)花粉生活力測定
1、b、c夏爾達考夫染色法：具有生活力的花粉粒中，含有過氧化物酶，它能促使過氧化物放出活性氧，這種氧是在花粉萌發時，進行的許多綜合反應時所必需的。因此，通過對過氧化物酶的測定，可間接地判斷花粉是否具有生活力。
(1) 預先配製下列溶液
① 0.20克聯苯胺溶於100毫公升50%酒精溶液中。
② 0.15α-萘酚溶於100毫公升之50%酒精溶液中。
③ 0.25克碳酸鈉溶於100毫公升之蒸餾水中。
以上三溶液分別裝入棕色瓶中貯藏備用(或用量瓶放在暗色避光處)，使用時將上述三種溶液等量混合，配成混合液，裝於棕色滴瓶中備用。
④ 在使用前配好0.3%過氧化氫溶液，裝於棕色滴瓶中備用。
(2) 操作步驟：
在載玻片上加入少量待測花粉，然後在花粉上滴一小滴混合液和一小滴過氧化氫溶液 ，用玻棒把花粉和溶液充分混合，再蓋上蓋玻片(蓋上後常出現很多氣泡，不要把氣泡認為花粉)，經過3—4分鐘後，在顯微鏡下檢查被染色和未染色的花粉粒數，因聯苯胺被氧化後呈蘭色，α—苯酚被氧分後呈紅色，同時被氧化則呈紫紅色，因此聯苯胺，α—苯酚和過氧化氫的混合液同時參與作用下，凡具生活力的花粉因含有過氧化物酶使過氧化氫釋放出氧，從而使花粉染成紅色。生活力愈強的花粉染色愈深，不具生活力的花粉則呈黃色和無色。
(3) 觀察和測定結果：
表二花粉染色記載表
每片觀察三個視野，總數不少於500粒左右，統計出具有生活力的花粉粒的%。
2、氯化三苯基四氮唑(簡稱t、t、c)染色法：具有生活力花粉的脫氫酶，在催化去氫的過程中，把氫轉移到它的物質上去，使用t、t、c與催化過程中產生的氫結合，使具有生活力的花粉粒變成紅色。
(1) 預先配製下列溶液：
① 磷酸鹽緩衝液：在100毫公升的蒸餾水中，溶解0.8323克的磷酸氫二鈉(na2 hpo4 2h2 o)和0.
273克的磷酸二氫鉀(kh2 po4)，調整ph值為7.17。
② t、t、c溶液：稱取0.02—0.05克的t、t、c溶解在10毫公升的磷酸鹽緩衝溶液中，溶液配好後，裝入棕色滴瓶內，置於暗處。
(2) 操作步驟：
① 取少量花粉放在載玻片上，並在花粉上滴1—2滴配製液，用玻棒混合後，蓋上蓋玻片。
② 將此蓋玻片置於恆溫箱中(35—40℃)約15—20分鐘。
③ 在顯微鏡(10×10)下觀察，凡具有生活力的花粉粒呈紅色，部分失去生活力的呈淡紅色，無色的是死的和不育的花粉粒。
(3) 觀察和測定結果：
表三花粉染色記載表
內容二蔬菜花粉生活力測定及發芽試驗
一、實驗目的
練習各種蔬菜花粉生活力測定的基本方法；了解不同蔬菜作物的花粉貯存條件對其生活力的影響。
二、原理
1、生活力測定
將花粉用某種化學藥品直接染色，根據花粉形態和染色情況判斷花粉生活力有無或強弱的方法。常用的方法有i2—ki溶液染色法，氯化三苯四氮唑法(ttc)，過氧化物酶測定法等，本試驗採用i2—ki溶液染色法。
2、發芽試驗法
是將花粉播到培養基上，使其吸收水和少量營養物質，觀察發芽情況，判斷花粉生活力。此法是最直觀可靠的。
三、實驗材料和用具
1、試材：白菜、黃瓜、茄子等蔬菜作物的新鮮花粉或貯藏花粉。
2、用具及藥品：載玻片、蓋玻片、顯微鏡、光照培養箱、鑷子、培養皿、凹玻片、染色缸、培養基、i2—ki溶液等。
四、實驗步驟
(一) 生活力的測定
1、取樣：採集成熟的新鮮花粉或貯存過的花粉。
2、染色液配製：先溶解2gki，後加入1gi2,全部溶解後定容成100毫公升，即製成含i為2%的母液，用前按需要稀釋即可。
3、染色：因正常花粉一般可積累比較多的澱粉，而敗育花粉則不積累澱粉，利用i2—ki對澱粉的特異染色反應可區分開來，正常的花粉呈藍黑色，敗育的花粉呈黃褐色。(注：
很小粒花粉視為敗育)。
4、統計及計算。
表1 花粉生活力測定記載表
(二) 發芽力測定
1、取樣：採集成熟的新鮮花粉或貯存過的花粉。
2、培養基製備：①成分：蔗糖10%~12%+硼酸0.01%+瓊脂0.5%。
②煮溶③滴定
④冷卻。
3、播種：用解剖針等尖細物將花粉均勻地播在培養基表面(勿弄破表面)。
4、培養：在25~28℃下，培養48小時。
5、鏡檢：在10×10倍下鏡檢。統計結果填表2。
表2 花粉發芽測定記載表
實驗二、園藝植物開花習性觀察及有性雜交育種
內容一果樹的開花習性觀察及有性雜交育種
一、實驗目的
本實驗通過教師講解、現場觀察、實際操作，使學生了解供試園藝植物的花器構造、開花習性並掌握有性雜交技術。
二、實驗方法及步驟
(1) 觀察供試園藝植物的花器構造、開花習性。
（2）確定雜交組合：根據當地的育種目標，在掌握親本性狀的遺傳傾向，品種開花早晚等前提來確定雜交組合。
雜交親本的選配，原則上要符合育種目標的要求，在經濟性狀上做到取長補短，在組合的選配中母本更為重要，最好具備下列條件：優點較多，缺點較少的生產品種，單胚性型別或平均胚數較少的品種，父本應具有花粉生活力強，某些相對性狀(如翼葉、胚的顏色)具有顯性，但雄蕊退化的品種不能作父本，對於高度自花授粉的無性胚佔優勢的柑桔類，雜交組合宜適當增多，每雜交組合的花朵數應不少於200朵。
植物組織培養實驗指導書
植物組織培養實驗指導 的相關說明 一 本指導用於 植物組織培養概論 課程的實驗教學。二 各專業班級根據實際情況做相應調整，調整情況詳見各專業班級的授課計畫。其中15個課時的內容調整如下 實驗一 二 五3學時 實驗六3學時 實驗七3學時 實驗九 實驗十二3學時 實驗十三3學時 實驗一實驗室基本裝置及其...
《花卉學》實驗指導書
實驗一花卉播種育苗實驗 一 目的要求 花卉繁殖是繁衍後代，儲存種質資源的手段，只有將種質資源儲存下來且繁殖一定的數量，才能為園林所應用，並為花卉選種 育種提供條件。因此掌握不同花卉的繁殖方法很有必要。通過幾種花卉的播種實驗，掌握花卉有性繁殖的基本環境條件 播種技術和播種苗管理等環節。二 原理 種子是...
選礦學實驗指導書
礦業學院 選礦學 實驗指導書 礦物加工教研室編寫 適用專業 礦物加工工程 貴州大學 二oo 七年八月 前言 選礦學 程涵蓋了礦產資源領域中近年來國內外選礦技術進展情況，本課程有主要包括了碎礦與磨礦 重力選礦 浮選 磁電選礦 綜合性實驗等基本部分，每個單元課程構成了整個選礦學的框架，每個課程單元著重介...