附件3：
試驗專案、試驗原則及結果判定
items, principles and result assessment
1 試驗專案
1.1 動物實驗
分為方案一（胰島損傷高血糖模型）和方案二（胰島素抵抗糖\脂代謝紊亂模型）兩種
1.1.1 方案一（胰島損傷高血糖模型）
1.1.1.1 體重
1.1.1.2 空腹血糖
1.1.1.3 糖耐量
1.1.2 方案二（胰島素抵抗糖\脂代謝紊亂模型）
1.1.2.1 體重
1.1.2.2 空腹血糖
1.1.2.3 糖耐量
1.1.2.4 胰島素
1.1.2.5 總膽固醇
1.1.2.6 甘油三酯
1.2 人體試食試驗
1.2.1 空腹血糖
1.2.2 餐後2小時血糖
1.2.3 糖化血紅蛋白（hba1c）或糖化血清蛋白
1.2.4 總膽固醇
1.2.5 甘油三酯
2 試驗原則
2.1 動物實驗和人體試食試驗所列指標均為必做專案。
2.2 根據受試樣品作用原理不同，方案一和方案二動物模型任選其一進行動物實驗。
2.3 除對高血糖模型動物進行所列指標的檢測外，應進行受試樣品對正常動物空腹血糖影響的觀察。
2.4 人體試食試驗應在臨床**的基礎上進行。
2.5 應對臨床症狀和體徵進行觀察。
2.6 在進行人體試食試驗時，應對受試樣品的食用安全性作進一步的觀察。
3 結果判定
3.1 動物實驗：
方案一：空腹血糖和糖耐量二項指標中一項指標陽性，且對正常動物空腹血糖無影響，即可判定該受試樣品輔助降血糖功能動物實驗結果陽性。
方案二：空腹血糖和糖耐量二項指標中一項指標陽性，血脂（總膽固醇、甘油三酯）無明顯公升高，且對正常動物空腹血糖無影響，即可判定該受試樣品輔助降血糖功能動物實驗結果陽性。
3.2 人體試食試驗：空腹血糖、餐後2小時血糖、糖化血紅蛋白（或糖化血清蛋白）、血脂四項指標均無明顯公升高，且空腹血糖、餐後2小時血糖兩項指標中一項指標陽性，對機體健康無影響，可判定該受試樣品具有輔助降血糖功能的作用。
輔助降血糖功能檢驗方法
method for the assessment of assisting blood
sugar reduction function
1.動物實驗
1.1實驗動物
選用成年動物，選用小鼠（262g）或大鼠（18020g），單一性別，大鼠每組8－12只、小鼠每組10－15只。
1.2材料
1.2.1試劑
四氧嘧啶（c4h2n2o4·h2o,分子量160.08）或鏈脲佐菌素、地塞公尺松磷酸鈉注射液、葡萄糖或醫用澱粉、血糖測定試紙或試劑盒，胰島素、甘油三酯、總膽固醇測定試劑盒
1.2.2 高熱能飼料
豬油10% 、蔗糖15% 、蛋黃粉15% 、酪蛋白5% 、膽固醇1.2% 、膽酸鈉0.2% 、碳酸氫鈣0.6%、石粉0.4%、鼠維持料52.6%
1.2.3儀器
血糖儀、全自動生化儀、可見光分光光度計、酶標儀、天平。
1.3劑量分組及受試樣品給予時間
實驗設三個劑量組和乙個模型對照組，以人體推薦量的10倍（小鼠）或5倍（大鼠）為其中的乙個劑量組，另設二個劑量組，高劑量一般不超過30倍，必要時設空白對照組。同時設給予受試樣品高劑量的正常動物組。受試樣品給予時間30天，必要時可延長至45天。
1.4實驗方法
1.4.1 正常動物降糖實驗
選健康成年動物按禁食3－5小時的血糖水平分組，隨機選1個對照組和1個劑量組。對照組給予溶劑，劑量組給予高劑量濃度受試樣品，連續30天，測空腹血糖值（禁食同實驗前），比較兩組動物血糖值。
1.4.2 高血糖模型降糖實驗
方案一1.4.2.1胰島損傷高血糖模型
1.4.2.1.1原理
四氧嘧啶（或鏈脲佐菌素）是一種細胞毒劑，可選擇性地損傷多種動物的胰島細胞，造成胰島素分泌低下，引起實驗性糖尿病。
1.4.2.1.2造模方法
購入成年動物，適應1天後，隨機取15只動物禁食3－5小時，測空腹血糖，作為該批次動物基礎血糖值。隨後動物禁食24小時（自由飲水），注射四氧嘧啶（用前新鮮配製）造模，小鼠45－50mg/kg bw.iv或125－130mg/kg bw.
ip，大鼠50－80mg/kg bw.iv或120－160mg/kg bw.ip。
5－7天後動物禁食3－5小時，測血糖，血糖值10－25mmol/l為高血糖模型成功動物。
1.4.2.1.3高血糖模型動物降糖實驗
選高血糖模型動物按禁食3－5小時的血糖水平分組，隨機選1個模型對照組和3個劑量組（組間差不大於1.1mmol/l）。劑量組給予不同濃度受試樣品，模型對照組給予溶劑，連續30天，測空腹血糖值（禁食同實驗前），比較各組動物血糖值及血糖下降百分率。
（實驗前血糖值－實驗後血糖值）
血糖下降率100％
實驗前血糖值
1.4.2.1.4高血糖模型動物糖耐量實驗
劑量分組及受試樣品給予時間同1.4.2。
各組動物禁食3－5小時，測定給葡萄糖或醫用澱粉前（即0小時）血糖值，劑量組給予不同濃度受試樣品，模型對照組給予同體積溶劑，15－20分鐘後各組經口給予葡萄糖2.0g/kg bw或醫用澱粉3－5g/kg bw，測定給葡萄糖後各組0.5、2小時的血糖值或給醫用澱粉後1、2小時的血糖值，觀察模型對照組與受試樣品組給葡萄糖或醫用澱粉後各時間點（0、0.
5、2小時）血糖值及血糖曲線下面積的變化。
（0小時血糖＋0.5小時血糖）×0.5 （2小時血糖＋0.5小時血糖）×1.5
血糖曲線下面積
22方案二
1.4.2.2胰島素抵抗糖\脂代謝紊亂模型(任選其一)
1.4.2.2.1地塞公尺松誘導胰島素抵抗糖\脂代謝紊亂模型
1.4.2.2.1.1原理
糖皮質激素具有拮抗胰島素生物效應的作用，可抑制靶組織對葡萄糖的攝取和利用，促進蛋白質和脂肪的分解及醣異生作用，導致糖、脂代謝紊亂，胰島素抵抗，誘發實驗性糖尿病。
1.4.2.2.1.2試驗方法
購入健康雄性大鼠（15020g），普通維持料適應飼養3－5天，禁食3－4小時，取尾血，測定空腹即給葡萄糖前（0小時）血糖值，給2.5g/kgbw葡萄糖後測定0.5、2小時血糖值，作為該批次動物基礎值。
以0、0.5小時血糖水平分5個組，即1個空白對照組、1個模型對照組和3個劑量組，每組15只。空白對照組不做處理，3個劑量組灌胃給予不同濃度受試樣品，模型對照組給予同體積溶劑，連續35天。
各組給予維持料飼養，1週後模型對照組和3個劑量組更換高熱能飼料，餵飼2週後，模型對照組和3個劑量組在高熱能飼料基礎上分別給予地塞公尺松0.8mg/kgbw腹腔注射（0.008%地塞公尺松注射量1ml/100g體重），每日1次，連續10－12天。
試驗結束，各組動物禁食3－4小時，檢測空腹血糖、糖耐量、血清胰島素及膽固醇、甘油三脂水平。
1.4.2.2.1.3 觀察指標
1.4.2.2.1.3.1 空腹血糖、糖耐量
各組動物禁食3－4小時，測定空腹血糖即給葡萄糖前（0小時）血糖值，劑量組給予不同濃度受試樣品，模型對照組給予同體積溶劑，空白對照組不做處理，15－20分鐘後各組經口給予葡萄糖2.5g/kg bw，測定給葡萄糖後各組0.5、2小時的血糖值，若模型對照組0.
5小時血糖值≥10mmol/l，或模型對照組0.5小時、2小時任一時間點血糖公升高或血糖曲線下面積公升高，與空白對照組比較，差異有顯著性，判定模型糖代謝紊亂成立，在此基礎上，觀察模型對照組與受試樣品組空腹血糖、給葡萄糖後（0.5、2小時）血糖及0、0.
5、2小時血糖曲線下面積的變化。
（實驗前血糖值－實驗後血糖值）
血糖下降率100％
實驗前血糖值
（0小時血糖＋0.5小時血糖）×0.5 （2小時血糖＋0.5小時血糖）×1.5
血糖曲線下面積
221.4.2.2.1.3.2 膽固醇、甘油三脂
各組動物禁食3－4小時，檢測血清膽固醇、甘油三脂，若模型對照組血清膽固醇或甘油三酯明顯公升高，與空白對照組比較，差異有顯著性，判定模型脂代謝紊亂成立，在此基礎上，觀察模型對照組與受試樣品組血脂變化。
1.4.2.2.1.3.3 胰島素
各組動物禁食3－4小時，檢測血清胰島素，模型對照組與空白對照組比較胰島素抵抗指數無明顯下降，且動物糖/脂代謝紊亂成立，判定胰島素抵抗糖\脂代謝紊亂模型成功。觀察模型對照組與受試樣品組胰島素抵抗情況。
血糖×胰島素
胰島素抵抗指數 = 胰島素/22.5e-㏑血糖
22.5
1.4.2.2.2四氧嘧啶誘導胰島素抵抗糖\脂代謝紊亂模型
1.4.2.2.2.1原理
高熱能飼料餵飼基礎上，輔以小劑量四氧嘧啶（c4h2n2o4·h2o,分子量160.08），造成糖/脂代謝紊亂，胰島素抵抗，誘發實驗性糖尿病。
1.4.2.2.2.2造模方法
購入健康雄性大鼠（15020g），普通維持料適應飼養3－5天，禁食3－4小時，取尾血，測定給葡萄糖前（即0小時）血糖值，給2.5g/kgbw葡萄糖後0.5、2小時血糖值，作為該批次動物基礎值。
以0、0.5小時血糖水平分5個組，即1個空白對照組、1個模型對照組和3個劑量組，每組15只。空白對照組不做處理，3個劑量組灌胃給予不同濃度受試樣品，模型對照組給予同體積溶劑，連續33天。
各組給予維持料飼養，1週後模型對照組和3個劑量組更換高熱能飼料，餵飼3週後，模型對照組和3個劑量禁食24小時（不禁水），給予四氧嘧啶103－105mg/kgbw腹腔注射，注射量1ml/100g體重。注射後繼續給予高熱能飼料餵飼3－5天。試驗結束，各組動物禁食3－4小時，檢測空腹血糖、糖耐量、血清胰島素及膽固醇、甘油三脂水平。
1.4.2.2.2.3 觀察指標
1.4.2.2.2.3.1空腹血糖、糖耐量
各組動物禁食3－4小時，測定空腹血糖即給葡萄糖前（0小時）血糖值，劑量組給予不同濃度受試樣品，模型對照組給予同體積溶劑，空白對照組不做處理，15－20分鐘後各組經口給予葡萄糖2.5g/kg bw，測定給葡萄糖後各組0.5、2小時的血糖值，若模型對照組0.
5小時血糖值≥10mmol/l，或模型對照組0.5小時、2小時任一時間點血糖公升高或血糖曲線下面積公升高，與空白對照組比較，差異有顯著性，判定模型糖代謝紊亂成立，在此基礎上，觀察模型對照組與受試樣品組空腹血糖、給葡萄糖後（0.5、2小時）血糖及0、0.
5、2小時血糖曲線下面積的變化。
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