由於三葉木通多數是野生的，因此我們在研究三葉木通的需肥特性時，不能採用像大棚類植物那樣對植物進行施肥，觀察它的生長狀況，進而來研究它的需肥特性，所以我們採取對野生三葉木通的花期、果實期（幼果期、成長期、成熟期）來進行三葉木通常量元素、微量元素的測定，從而來判斷三葉木通的需肥特性。（鑑於同一植物不同生育期、不同部位間營養元素本身有相當大的差異，所以對三葉木通從開花到果實成熟都進行取樣來測定）
一、 三葉木通常量元素的測定。（植物的常量元素通常指氮、磷、鉀、鈣、鎂和硫）
(一) 植株全氮的測定( h2so4- h2o2消煮，奈氏比色法)。
操作步驟：稱磨細烘乾的樣品0.1000~0.
2000g，置於開氏瓶或消化管中，先用水濕潤樣品，然後加濃h2so4 5ml，輕輕搖勻(最好放置過夜)，瓶口放乙個彎頸漏斗，在消化爐上先低溫緩緩加熱，待濃硫酸分解冒白煙逐漸公升高溫度。當溶液全部呈棕黑色時從消化爐上取下開氏瓶，稍冷，逐滴加入300g·l-1 h2o2 10滴，並不斷搖動開氏，以利反應充分進行。再加熱至微沸10~20min，稍冷後再加入h2o2 5~10滴 。
如此反覆2~3次，直至消煮液呈無色或清亮色後，再加熱5~10min，以除盡過剩的雙氧水。取出開氏瓶冷卻，用少量水沖洗小漏斗，洗液洗入瓶中。將消煮液用水定容至100ml，取過濾液(或取放置澄清的上清液)供n、p、k等元素的測定。
消煮時應同時做空白試驗以校正試劑誤差。
取上述待測液1~5ml ，置於50ml容量瓶中，加100 g·l-1酒石酸鈉溶液2ml ，充分搖勻，再加入100 g·l-1 koh溶液中和溶液中的酸(koh的加入量可這樣確定：另取乙份待測溶液，以酚酞作指示劑，測定中和這份溶液所需koh的ml數)，加水至40ml，搖勻，加奈氏試劑2.5ml，用水定容後充分搖勻。
30min後用分光光度計比色，波長為420nm。
(二) 三葉木通磷的測定。（溶液中磷一般用比色法測定。）
植物樣品經h2so4- h2o2消煮分解製備待測液。
操作步驟：吸取消煮好經過濾的待測液20~25ml(含p 0.25~1.
0mg)，置於50ml容量瓶中，加2,6-二硝基酚指示劑2 滴，用6mol·l-1naoh溶液中和至剛呈黃色，加入釩鉬酸銨試劑10.00ml，用水定容。放置15min後用波長450nm，在分光光度計上比色，以空白液調節儀器零點。
(三) 待測液中的鉀可直接用火焰光度計法測定。
操作步驟：吸取消煮好的待測過濾液5ml置於50ml容量瓶中，用水定容用分光光度計測定k。
製作標準曲線：在excel上計算其相關係數r。但必須加入與待測液中相同量的其它離子成分(即加空白消煮5ml)
(四) 溶液中鈣鎂的測定，目前都用edta配合滴定法或原子吸收分光光度法。
操作步驟：進行灰化。冷卻後用少量水濕潤灰分，然後小心滴加hcl約20ml，慎防灰分飛濺損失，加熱至沸以溶解殘渣。
用熱水將其無損地洗入100ml容量瓶中，冷卻後定容過濾，濾液備用。
反滴定法鈣的測定：吸收上述待測液10ml(約含鈣1~5mg)，放入150ml三角瓶中，用水稀釋至50ml，加入1∶1三乙醇胺2ml，搖勻，再加4 mol·l-1 naoh 2ml，搖勻放置2min待mg(oh)2沉澱後立即加入k-b指示劑0.1~0.
2g，加入0.01 mol·l-1edta標準溶液10ml，此時溶液呈藍色，然後用0.01 mol·l-1ca標準溶液反滴定過剩的edta，終點為藍綠色突變為紫紅色。
同時做鈣空白標定：吸取空白液10ml(即1.2mol·l-1hcl約20ml 的稀釋液)同上步驟進行滴定。
鈣+鎂總量的測定：另取上述待測液10ml(約含鈣1~5mg)，放入150ml三角瓶中，用水稀釋至50ml，加入1∶1三乙醇胺2ml，搖勻，再加氨緩衝液5ml，搖勻。加入k-b指示劑0.
1~0.2g，加入0.01 mol·l-1edta標準溶液10ml，此時溶液呈藍色，然後用0.
01 mol·l-1ca標準溶液反滴定過剩的edta，終點為藍綠色突變為紫紅色。 同時做鈣+鎂空白標定：吸取空白液10ml(即1.
2 mol·l-1 hcl 約20ml 的稀釋液)同上步驟進行滴定。
二、 三葉木通微量元素的測定。（硼、錳、鋅、銅和鉬是植物生長必需的微量元素）
(一) 硼的測定。
方法原理: 植物樣品用乾灰化法灰化，稀鹽酸溶解灰分，溶液中硼以薑黃素比色法測定。
操作步驟：稱取過0.5mm篩孔的烘乾植物樣品0.
5~1.0000g，置於石英坩堝中(種子樣品加少許飽和氫氧化鈣溶液以防硼的損失)，在電爐上加熱炭化，再移入高溫電爐中500℃2~3h，灰化後冷卻準確加入 0.1mol·l-1hcl 溶液10~20ml溶解灰分。
移入100ml容量瓶定容，過濾或靜置澄清後吸取1.00ml測定硼。
(二) 錳的測定（高錳酸鉀比色法）。
操作步驟：進行灰化，灰化後準確加入1∶1硝酸溶液 5ml溶解灰分，溶解後無損地移入50ml容量瓶中，用水定容。用乾濾紙過濾，濾液收集在幹塑料瓶內。
吸取濾液10.00~25.00ml，置於100ml燒杯中(如濾液不足25ml，可加水補足25ml)，以下進行顯色、測定。
(三) 銅、鋅的測定——aas法。
操作步驟：進行灰化，灰化後準確加入1∶1硝酸溶液5ml溶解灰分，溶解後無損地移入50或100ml容量瓶中，用水定容。用乾濾紙過濾，濾液收集在幹塑料瓶內。
可直接用原子吸收分光光度計進行測定。銅、鋅測定時的操作引數見儀器說明書。 標準曲線的製作：
參照銅、鋅的標準系列配製標準曲線系列溶液，加入與待測溶液相同量的硝酸或鹽酸，用水定容。在樣品測定的同時，在完全相同的條件下，測定其吸收值，製作標準曲線。
(四) 鉬的測定(催化極譜儀法)。
操作步驟 ：進行灰化，加2.5mol·l-1硫酸溶液2.
50ml和0.4 mol·l-1苯羥乙酸2.50ml溶解灰分，待完全溶解後，加500g·l-1naclo3 溶液5.
0ml，混勻後移入電解杯中，在極譜儀上從-0.1v開始記錄鉬的極譜波，測量峰後波的波高。依據標準曲線計算樣品鉬的含量。
標準曲線的製作：分別吸取含0、0.02、0.
04、0.08、0.16、0.
24μg mo標準溶液於50ml硬質燒杯中，加1∶1hcl溶液1ml，在電爐上低溫蒸乾，按上步驟加入硫酸、苯羥乙酸和氯酸鈉溶液，在與待測液相同條件下，於極譜儀上測定鉬的極譜波，測量峰後波的波高，作鉬的質量-峰後波高度的標準曲線。
三、 結果分析。
通過對三葉木通不同時期的常量、微量元素的測定，了解三葉木通不同時期各種元素的含量狀況，從而來對三葉木通需肥特性進行研究。
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