透析液更換加收集標準化步驟及注意事項

透析液更換及標記後抗體收集標準化步驟

透析液更換步驟：

1、透析袋扎好之後，將透析袋放入20mm 2l pbs溶液中進行透析（視標記抗體的量而變化，標記體積小時可用1l體系的透析液），同時在燒杯上要封上一層保鮮膜，以防其他液體滴入造成汙染，透析袋用塑料夾夾緊固定；

2、透析液（ph 7.4 20mm pbs）每隔4—6小時更換一次；

3、抗體標記ae時，每更換一次透析液之前，都必須取出10ul透析液，測試其發光值，當最後兩次透析液的發光值均在5000以下時（及時填寫抗體透析**），方可收集抗體；

4、抗體標記bio時，如果同時標記ae，則視ae的透析次數而定，如果單獨標記bio，則更換透析液的次數，至少為5次；

5、收集：按標記抗體：抗體儲存液=4:1的體積比例加入抗體儲存液，按加完儲存液後的體積1：1加入甘油，然後貼好標籤放-20℃冰箱內儲存。

抗體收集及儲存步驟：

1、收集體積：300ul標記體系，固定收集體積為400ul，150ul體系，固定收集體積為200ul，抗體收集體積不足規定體積時用20mm pbs溶液補足；

2、量抗體體積：以300ul標記體系為例，第一槍用200ul量程收集，第二槍仍然用200ul量程去吸，之後調槍，看測量值多大，例如第二槍的體積為150ul，最後還需加入50ul的20mm pbs補足體積至400ul；

3、加抗體儲存液：按收集抗體：抗體儲存液=4:1的體積比例加入抗體儲存液，例如收集的抗體體積為400ul，則需加入100ul抗體儲存液；

4、加甘油：按加完儲存液後的體積1：1加入甘油，因為甘油比較粘稠，所以，吸取時需要對槍頭進行處理，要用剪刀剪掉1cm左右槍頭，注意，剪刀使用前需要用純水沖洗一下；

5、吹打混勻：收集好的抗體還需要進行吹打混勻，加完甘油後直接吹打，不需要更換槍頭，反覆吹打至無明顯的分液現象方可，若沒有吹打均勻，-20℃條件下易結凍；

6、貼標籤：在ep管的周身貼好標籤後，要在標籤表層貼上一層透明膠袋，並在ep管的管帽上寫上抗體名稱-ae/bio，標記時間等，方便尋找。

7、收集好抗體之後，還需進行驗證，驗證抗體標記的可用性。

注意事項：

1、每換一次透析液，都應用純水將透析袋沖洗一遍，將透析袋上的ae和bio沖掉，然後再重新加滿透析液進行透析；

2、取樣（抗儲、甘油）時，不能直接從原裝瓶中直接取樣，要事先取出一管，在小管中取用。

3、收集抗體時，加入甘油後一定要用槍吹打，將其混勻，再放入-20℃儲存。

4、透析用的轉子：規定2l體積，用4.5cm轉子，1l體積，用2cm轉子。