幾種酶的測活SOD POD GSH

2023-01-08 20:40:40 字數 1097 閱讀 7619

5平衡後的離心管放入離心管機中進行離心(8min*5000rmp)離心後收集上清液置於對應標號的試管中不要沉澱

6在預熱30min的分光光度計下調定吸收值,波長分別為532、600、450nm,要求每次測定完後倒入原來的管號中

顯色反應及測定吸取2 ml提取液,加入2ml0.6%硫代巴比妥納(tba)液,混勻,在試管上加蓋塞,置於水浴中沸煮(用電熱套燒水不安全,能買個電飯煲嗎?) 15min,迅速冷卻,離心。

取上清夜測定532nm、540nm處的od值,對照管以2 ml水代替提取液。然後計算每克樣品中mda的含量。c=6.

45od532-0.56od450

(1) 式中:c—為mda的濃度,mg/l。

mda含量= c*v/(a*10002)式中:c—mda濃度,mg/l;v—提取液總體積,ml;a—取樣鮮重,g。

方法一:還原型穀胱甘肽(gst)測活分光光度法

在25 ml比色管中, 分別加入0. 9 ml顯色劑、5. 0 ml ph 值為4.

0 的hac-naac緩衝溶液及適量的還原型穀胱甘肽標準溶液, 用蒸餾水定容, 迅速塞緊比色管, 放入沸水浴中加熱10m in, 取出, 用流水冷卻10 min, 以試劑空白為參比, 用1 cm 比色皿在490 nm處測量吸光度。

顯色劑: 稱取鄰菲羅啉0.0910 g, 加入1 mol/l鹽酸溶液2ml、硫酸鐵銨0.2380 g, 溶解後用水稀釋至100 ml;

方法二:dtnb法擬採用

方法:樣品1 式2 份,ph8.0 條件下分別和甲醛反應2 min 和60min,各取1ml 加入5mldtnb 溶液,25℃反應5min 後分別測定在波長412nm 的吸光度,算出2者的差值△a,代入標準曲線計算得出穀胱甘肽含量。

得到穀胱甘肽濃度在0.19—0.95gl-1之間線性關係良好,回歸方程為:

y=0.7154x-0.0004,r=0.

9999,最大誤差不超過6%。

gsh 和dtnb 反應生成黃色的5- 硫代-2 硝基苯甲酸,在412nm 波長有最大吸收峰。

在實驗室的藥品清單中我發現有catalase(ec)(cat)和superoxide dismustase(sod),請問這兩個藥品是用來幹什麼的?我們不是要測這兩種酶的活性嗎?怎麼有這兩種酶的成品?

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