中和試驗檢測低水平HbsAg的意義

2022-10-12 02:00:07 字數 1346 閱讀 8789

我國廣泛用酶免疫法(elisa)檢測hbv血清標誌物,但elisa法存在「灰區」,低水平的檢測值無法避免假陽性、假陰性。近年來微粒子酶免法(meia)和化學發光法(clia)等靈敏度高的自動化檢測方法逐步應用,檢測下限越來越低,低水平hbsag檢測率逐步增加,但是自動化檢測成本昂貴,不易作為常規應用。中和試驗因靈敏度和特異性都很高,在病毒學檢測中往往作為確認試驗。

本文用中和試驗對低水平hbsag進行檢測,初步**其臨床意義。

1.物件與方法

1.1 研究物件

本院經elisa試劑盒檢測hbsag為弱陽性(1≤s/co≤5)血清樣本35例,經clia檢測hbsag為弱陽性(0.05iu/ml≤報告值≤2.00 iu/ml)的血清樣本10例.

1.2 檢測方法

(1)elisa檢測hbsag採用上海科華公司試劑盒,clia檢測hbsag採用雅培architect i2000sr免疫發光分析儀及配套試劑。

(2)elisa中和試驗方法:採用珠海麗珠公司hbsag中和試劑盒檢測。試驗原理[1]:

在用抗-hbs抗體包被的微孔中分別加入含抗-hbs抗體的試劑和待測血清,試劑中的特異性抗-hbs抗體與固相抗-hbs競爭結合血清中的hbsag,從而使結合到固相上並與酶標抗-hbs結合形成夾心複合物的hbsag量減少,最後顯色反應較淺,計算抑制率並與對照孔比較,可以判斷血清中是否存在hbsag。

2.結果

2.1 elisa法中和試驗結果

如表1所示,elisa檢測為弱陽性的35例樣本,經中和試驗確認有8例陰性,27例陽性。

2.2 經clia檢測為弱陽性的10例樣本,中和試驗確認有4例陽性,見表2。

2.3 中和試驗抑制率與肝功能、hbv-dna的關係45例低水平hbsag樣本經的肝功能及hbv-dna結果,見表3,抑制率值越大,肝功能異常率越高,hbv-dna陽性率也越高。

3.討論

本次試驗的45例低水平hbsag血清樣本中,elisa法確認試驗確認為hbsag陽性31例、陰性14例,而化學發光法檢測45例樣本均為陽性。可見elisa與化學發光法檢測低水平hbsag結果存在不一致性。elisa檢測hbsag影響因素較多,溫育溫度、時間及方式對elisa測定結果均有影響,因此,低水平的hbsag篩查值的確認極其重要。

《全國臨床檢驗操作規程》建議必要時應採用中和試驗進行確認,特別是弱陽性的檢測結果需進一步確認。

雖然低濃度的hbsag的患者佔B肝病毒感染者的比例很低,但在臨床實踐中,低濃度的hbsag樣本(低於國產試劑的檢測下限)也經常能被發現, 血清hbsag呈低濃度存在可能有多種原因,但主要原因是大多數hbv感染患者隨著年齡增長,hbv逐漸清除,hbsag逐漸下降,並可能伴有血清學轉換,出現抗-hbs等。「弱反應性」檢測結果的確認應使用特異性高的方法,比如中和試驗,作為確認試驗可減少錯誤檢查結果的誤導。

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