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藥品中微生物的存在，可能影響藥品安全，危及人體健康。微生物檢查，按藥品種類、給藥途徑等要求的不同分無菌檢查和微生物限度檢查。
藥品衛生檢驗是指對滅菌製劑的無菌試驗和對非規定滅菌製劑的微生物限量檢查。也稱為藥品的微生物檢驗。
《中國藥典》規定微生物檢查應在環境潔淨度10 000級和區域性潔淨度100級的單向流空氣區域內或隔離系統中進行，其全過程必須嚴格遵守無菌操作，防止微生物汙染。單向流空氣區、工作檯面及環境應定期按《醫藥工業潔淨室（區）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現行國家標準進行潔淨度驗證。
一、 無菌檢查法
（一）微生物檢驗的無菌技術
無菌技術：是指在整個微生物檢驗過程中，控制微生物汙染的一系列操作方法和措施。包括無菌環境、無菌實驗器材、無菌操作。
1、無菌環境：
（1）無菌實驗室
（2）淨化工作台
（3）無菌櫃
2、無菌器材
（1）消毒器材
（2）滅菌器材
3、無菌操作
無菌操作：是指在無菌環境條件下，使用無菌器材進行檢驗或實驗的過程。
目的：1）保證待檢物品不被環境中微生物汙染。
2）放置被檢微生物在操作中汙染環境或感染操作人員。
（二）藥品的無菌檢查
1、無菌檢查的概念和範圍
無菌檢查法：指檢查無菌或滅菌制製品、敷料、縫合線、無菌器具及適用於藥典要求無菌檢查的其他品種是否無菌的一種方法。
如各種注射劑、眼用製劑、植入劑、外科用敷料和器材等。
2、培養基
原則：應澄清無沉澱無菌
3、陽性對照菌及抑制菌試驗
1）陽性對照菌
2）抑細菌和抑真菌試驗
4、無菌製劑的無菌檢查法
5、無菌檢查結果的判定
二、 細菌、黴菌及酵母菌計數檢查法
本法採用平板菌落計數法，即供試品稀釋一定倍數，經一定時間微生物培養後，以瓊脂
平板上的細菌、黴菌或酵母菌形成的乙個獨立可見的菌落為計數，作限度檢查判斷依據。測定結果只反映在規定條件下所生長的細菌（嗜中溫、需氧和兼性厭氧菌）、黴菌和酵母菌的菌數，不包括對營養、氧氣、溫度、ph值和其他因素有特殊要求的細菌、黴菌和酵母菌。
（一）適用範圍
本法適用於需檢查受微生物汙染程度的非規定滅菌製劑及藥物原料、輔料等。
（二）儀器與用具
高壓蒸汽消毒鍋、電熱恆溫培養箱、電熱鼓風乾燥箱、電冰箱、混懸儀、淨化工作台等。 （三）試藥與試液
營養瓊脂培養基、玫瑰紅鈉培養基、瓊臘培養基、營養肉湯、生理鹽水、單硬脂酸甘油酯、聚山梨酯等。
（四）檢查方法
1、檢驗量及供試液的製備
1）檢驗量一般供試品的檢驗量為10g或10;膜劑為100 cm2；貴重藥品、微量裝藥品檢驗量可酌減。檢驗時，應從2個以上最小包裝單位中抽取供試品，大蜜丸、膜劑不得少於4丸（片）。一般隨機抽取不少於檢驗用量的3倍量供試品。
2）供試液的製備
(1)液體供試品：取供試品10 ml，加ph值為7.0無菌氯化鈉一蛋白腖緩衝液至100 ml，混勻，作為1：
10的供試液。油劑可加入適量的無菌聚山梨酯使供試品分散均勻。水溶性液體製劑也可用混合的供試品原液作為供試液。
(2)固體、半固體或黏稠性供試品：取供試品10 g，加ph值為7.0無菌氯化鏈一蛋白腖緩衝液至100 ml，用勻漿儀或其他適宜的方法，混勻，作為1：
10的供試液。必要時加適量的無菌聚山梨酯，並置水浴中適當加溫使供試品分散均勻。
取製備好的供試液，用ph值為7.0無菌氯化鈉一蛋白腖緩衝液稀釋成1：10、1:100、
1：1 000、1：10 000等稀釋級供試液供接種培養用。
2、操作方法
1）平皿法：
（1）供試品試驗：以吸管取各稀釋級供試液1 ml，置直徑90 mm的無菌平皿中，注入15—20ml溫度不超過45℃的溶化的營養瓊脂培養基或玫瑰紅鈉瓊脂培養基或酵母浸出粉腖萄糖瓊脂培養基，混勻，凝固，倒置培養。每稀釋級每種培養基至少製備2個平板。
（2）陰性對照試驗：取試驗用的稀釋液1 ml，置無菌平皿中，注入培養基，凝固，倒置培養。每種計數用的培養基各製備2個平板，均不得有菌生長。
（3）培養和計數：除另有規定外，細菌培養3d，黴菌、酵母菌培養5 d，逐日觀察菌落生長情況，點計菌落數，必要時，可適當延長培養時間至7d進行菌落計數並報告。菌落蔓延生長成片的平板不宜計數。
點計菌落數後，計算各稀釋級供試液的平均菌落數，按菌落報告規則報告菌數。若同稀釋級兩個平板的菌落數平均不小於15，則兩個平板的菌落數不能相差50%或以上。
計數時，一般在平板背面用肉眼直接點數（細菌、黴菌、酵母菌菌落形態特徵見表4-4），必要時用放大鏡檢查或用低倍顯微鏡直接觀察，或挑取可疑物塗片鏡檢。
一般營養瓊脂培養基用於細菌計數；玫瑰紅鈉瓊脂培養基用於黴菌及酵母菌計數；在特殊情況下，若營養瓊脂培養基上長有黴菌和酵母菌、玫瑰紅鈉瓊脂培養基上長有細菌，則應分別點計黴菌和酵母菌、細菌菌落數。然後將培蕎基上的黴菌和酵母菌數或玫瑰紅鈉瓊脂培養基上的細菌數，與玫瑰紅鈉瓊脂培養基中的黴菌和酵母菌或營養培養基中的細菌數進行比
較，以菌落數高的培養基中的菌數為計數結果。
含蜂蜜、蜂王漿的液體製劑，用玫瑰紅鈉瓊脂培養基測定黴菌數，用酵母浸出粉腖葡萄糖瓊脂培養基測定酵母菌數，合併計數。
表4 -4細菌、黴菌、酵母茵形態特徵比較（營養瓊脂及玫瑰紅鈉瓊脂平板）
（4）菌落報告規則：細菌、酵母菌宜選取平均菌落數在30～300 cfu、黴菌平均菌落數小於100cfu的稀釋級，作為菌數報告（取兩位有效數字）的依據。以最高的平均菌落數乘以釋倍數的值報告1g、1 ml或10 cm2供試品中所含的菌數。
如各稀釋級的平板均無菌生長，或僅最低稀釋級的平板有菌落生長，但平均菌落數小於30cfu，以該數乘以最低稀釋倍數的值報告菌數。
2、膜過濾法
（1）供試品試驗：取相當於每張濾膜(規格為直徑50 mm，孔徑不大於0.45um)含1g或1 ml的供試品液，加至適量的稀釋劑中，混勻，過濾。
若供試品每1g或1 ml所含的菌數較多時，可取適宜稀釋級的供試液1 ml，過濾。用ph值為7.0無菌氯化鈉一蛋白腖緩衝液或其他適宜的沖洗液沖洗濾膜。
沖洗後取出濾膜，菌面朝上貼於適宜培養基平板上培養。每種培養基至少製備一張濾膜。
（2）陰性對照試驗：取試驗用的稀釋液1 ml，照上述薄膜過濾法操作，作為陰性對照，對照不得有菌生長。
（3）培養和計數：培養條件相計數方法同平皿法，每片濾膜上的菌落數應不超過100cfu。
（4）菌數報告規則：以相當於1 g或1 ml供試品的菌落數報告菌數；若濾膜上無菌生長，以該數報告菌數（每張濾膜過濾1 g或l ml供試品），或該數乘以稀釋倍數的值報告菌數。
五、注意事項及說明
1、複試供試品細菌數、黴菌和酵母菌數其中任一項一次檢驗不合格，應從同一批
樣品中隨機重新取2倍包裝量的供試品，依法作單項複試兩次，以三次檢驗結果的均值報告。若3次結果的平均值不超過該品種項下的規定，判供試品符合規定：否則，判供試品不符合規定。
2、計數方法驗證由於某些供試品具有抗菌活性，在建立測定方法或原測定法的檢
驗條件發生改變時，可能影響檢驗結果的準確性，必須對供試品的抑菌活性及測定方法的可靠性進行驗證。驗證時，按供試液的製備和細菌、黴菌及酵母菌計數所規定的方法，對各驗證用試驗菌的**率應逐一進行驗證。驗證試驗可與供試品的細菌、黴菌及酵母菌計數同時進行。
具體內容見相關資料，在此略過。
六、記錄
記錄供試品名稱、批號、培養基名稱、實驗方法、實驗條件、供試液配製、培養時間、細菌數、黴菌和酵母菌落數等。
七、測定結果判斷
按菌數報告規則，根據菌數計數結果，不超過該品種劑型細菌、黴菌及酵母菌限度要求
為符合規定。
三、 藥品中控制菌的檢查
藥品的控制菌檢查時指對規定滅菌製劑及其原輔料中汙染的大腸桿菌、沙門菌、銅綠
假單胞菌、金黃色葡萄球菌、破傷風梭菌進行檢查。
以大腸桿菌的檢查為例：
（一）原理
大腸桿菌主要寄生在人和動物的腸道內，構成倡導的正常菌群，他可以隨糞便排出體外汙染自然界。通過檢查藥品中是否存在的大腸桿菌及其數量，可判斷樣品受糞便汙染的情況，簡介反應腸道病原菌存在的可能性，藥品中如檢測出大腸桿菌，表明該藥品已被糞便汙染，服用後有可能被病原體感染。因此，大腸桿菌被列為糞便汙染指示菌，是非規定滅菌口服藥品的常規必檢專案。
《中國藥典》（2023年版）採用mug-indole（mug-i）方法快速檢出大腸桿菌。該方法利用94%大腸桿菌可分解4-甲基傘形酮-β-d葡萄糖醛酸苷（mug）產生螢光，結合靛基質（indole）試驗，i輔以伊紅美蘭瓊脂（emb）平板分離，imvic試驗，理論上檢出99.0%的大腸桿菌。
（二）儀器與用具
高壓蒸汽消毒鍋、電熱恆溫培養箱、電熱鼓風乾燥箱、電冰箱、試管架、托盤天平、刻度吸管(1 ml、2 ml、10 ml)、試管、三角瓶、量筒、廣口瓶、燒杯、酒精燈、培養皿、研缽、鑷子、藥匙、剪刀、稱量紙、無菌衣（帽、口罩）、洗耳球、脫脂棉、脫脂紗布、棉塞、線繩等。
（三）試藥與試液
乳糖膽鹽培養基、mug培養基、emb瓊脂培養基、麥糠凱瓊脂培養基、生理鹽水、蛋白腖水培養基、磷酸鹽葡萄糖腖水培養基等。
（四）檢驗程式
供試品供試液 bl增菌培養
mug-indole試驗
抗菌藥物檢查標準
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