雙抗體夾心elisa法檢測樣本中il-1β的濃度
檢測原理:
本試劑盒採用雙抗體夾心elisa法檢測樣本中il-1β的濃度。il-1β捕獲抗體已預包被於酶標板上，當加入標本或參考品時，其中的il-1β會與捕獲抗體結合，其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。當加入生物素化的抗人il-1β抗體後，抗人il-1β抗體與il-1β接合，形成夾心的免疫複合物，其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。
隨後加入辣根過氧化物酶標記的親合素。生物素與親合素特異性結合，親合素連線的酶就會與夾心的免疫複合物連線起來；其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。最後加入顯色劑，若樣本中存在il-1β將會形成免疫複合物，辣根過氧化物酶會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質，在加入終止液後呈黃色。
通過酶標儀檢測，讀其450nm處的od值，il-1β濃度與od450值之間呈正比，通過參考品繪製標準曲線，對照未知樣本中od值，即可算出標本中il-1β濃度。
標本收集:
1.標本的收集請按下列流程進行操作：
a.細胞上清標本離心去除懸浮物後即可；
b.血清標本應是自然凝固後，取上清，避免在冰箱中凝固血液；
c.血漿標本，推薦用edta的方法收集若待測樣本不能及時檢測；
d.標本收集後請分裝，凍存於－20℃，避免反覆凍融。
2.血清標本不應新增任何防腐劑或抗凝劑；
3.標本應清澈透明，檢測前樣本中如有懸浮物應通過離心去除；
4.請勿使用溶血，高血脂或汙染的標本檢測，否則結果將不準確。
注：正常人血清或血漿樣本請用標本緩衝液做倍比稀釋後再檢測。
注意事項:
1.試劑盒請儲存在2～8℃。
2.濃縮洗滌液因在低溫下可能有結晶，請水浴加熱使結晶完全溶解後再配製工作液。
3.若標準品復溶後，請在三天內用完。
4.底物請勿接觸氧化劑和金屬。
5.加樣時，請及時更換槍頭，避免交叉汙染。
6.嚴禁混用不同批號的試劑盒組份。
7.充分混勻對保證反應結果的準性很重要，在加液後請輕輕叩擊邊緣以保證混勻。
8.室溫反應，請嚴格控制在25～28℃。
9.洗滌過程是至關重要的，洗滌不充分會使精確度下降並導致結果誤差較大。
10.試驗中標準品和樣本檢測時建議作雙復孔。
11.加樣過程中避免氣泡的產生。
12.血清和血漿標本的檢測時，檢測抗體的孵育時間應適當延長。
檢測前準備工作:
1.試劑盒自冰箱中取出後應置室溫平衡20分鐘；每次檢測後剩餘試劑請及時於2～8℃儲存。
2.將濃縮洗滌液用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加19份水)。
3.標準品:加入標準品稀釋液0.
25ml至凍乾標準品瓶中使il-1β終濃度達到250pg/ml，靜置15分鐘後輕輕混懸待徹底溶解，用標準品稀釋液倍比梯度稀釋後依次加入檢測孔中。（標準曲線取七個點，最高濃度為250pg/ml,標準品稀釋液直接加入作為0濃度.）
洗滌方法:
自動洗板機或人工洗板：每孔洗滌液為300ul，注入與吸出間隔15-30秒。洗板5次。最後一次洗板完成後將板倒扣著在厚吸水紙上用力拍乾。
實驗過程需自備的材料：
1.不同規格的加樣槍及相應的槍頭； 2.酶標儀； 3．自動洗板機； 4．去離子水或雙蒸水；
操作步驟:
1.通過計算並確定一次性實驗所需的板條數，取出所需板條放置在框架內，暫時用不到板條請放回鋁箔袋密封，儲存於4℃。
2.建議設定本底較正孔，即空白孔,設定方法為該孔只加tmb顯色液和中止液。每次實驗均需做標準品對照並畫出標準曲線。
3.分別將標本或不同濃度標準品(100ul/孔)加入相應孔中，用封板膠紙封住反應孔，室溫孵育120分鐘。對於血清或血漿標本，**入50ul樣本分析緩衝液後加50ul標本，如稀釋量大，請將樣本與樣本分析緩衝液等量加入，不足部分用標準品稀釋液補充至100ul。
4.洗板5次，且最後一次置厚吸水紙上拍幹。
5.加入生物素化抗體工作液(100ul/孔)。用封板膠紙封住反應孔，室溫孵育60分鐘。
6.洗板5次，且最後一次置厚吸水紙上拍幹。
7.加入酶結合物工作液(100ul/孔)。用封板膠紙封住反應孔，避光室溫孵育20分鐘。
8.洗板5次，且最後一次置厚吸水紙上拍幹。
9.加入顯色劑tmb100ul/孔，避光室溫孵育20分鐘。
10.加入終止液50ul/孔,混勻後即刻測量od450值。
結果判斷:
1.復孔的值在20%的差異範圍內結果才有效，復孔的值平均後可作為測量值。
2.每個標準品或標本的od值應減去本底校正孔的od值。
3.手工繪製標準曲線。以標準品濃度作橫座標，od值作縱座標，以平滑線連線各標準品的座標點。通過標本的od值可在標準曲線上查出其濃度。
4.若標本od值高於標準曲線上限，應適當稀釋後重測，計算濃度時應乘以稀釋倍數。
靈敏度，特異性和重複性:
1.靈敏度：多次重複結果表明，最小檢出量為2.2pg/ml。
2.特異性：與人il-1rα、il-1srii、il-1sri、小鼠il-1α、il-1β等沒有交叉反應。
3.重複性：板內，板間變異係數均<10%.
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