10科四譚曉東 20102501024
一、實驗目的：
1.了解植物在逆境下的研究方法
2.學會使用dds-11a型電導率儀，掌握絕對電導率和相對電導率的概念；
3.熟悉植物組織過氧化物酶活性的測定方法，學會分光光度計的「動力學」測量程式
二、實驗原理：
1. 植物組織受到逆境傷害時，由於膜的功能受損或結構破壞，而使其透性增大，細胞內各種水溶性物質包括電解質將有不同程度的外滲，將植物組織浸入無離子水中，水的電導將因電解質的外滲而加大，傷害愈重，外滲愈多，電導度的增加也愈大。故可用電導儀測定外液的電導度增加值而得知傷害程度。
2. 過氧化物酶廣泛分布於植物的各個組織器官中。在有過氧化氫存在下，過氧化物酶能使愈創木酚氧化，生成茶褐色物質，此產物在470 nm 處有最大光吸收值，故可通過測470 nm下的吸光度變化測定過氧化物酶的活性。
三、器材和試劑
1.實驗用具：分光光度計、dds-11a型電導率儀、容量瓶
2.實驗試劑：kh2po4
3.實驗材料：綠豆幼苗
四、實驗步驟
五、實驗結果
1、電導率的測定
2、過氧化物酶（pod）活性測定
六、分析與討論
1、電導率法檢測植物細胞質膜透性
植物細胞膜起調節控制細胞內外物質交換的作用，它的選擇透性是其最重要的功能之一。膜結構破壞的程度與逆境的強度、持續的時間、作物品種的抗性等因素有關。當植物受到逆境影響時，如高溫或低溫，乾旱、鹽漬、病原菌侵染後，細胞膜遭到破壞，膜的透性增加，選擇透性喪失，細胞內部分電解質外滲，其中包括鹽類、有機酸等，這些物質進入環境介質中，如果環境介質是蒸餾水，那麼這些物質的外滲會使蒸餾水的導電性增加，將植物組織浸入去離子水中，水的電導將因電解質的外滲而加大，傷害愈重，外滲愈多，電導率愈大。
所以在電導率法檢測植物細胞質膜透性的實驗中，處理材料的溫度越高，對植物組織的損害程度越大，其電導率和相對導電率應該是越高。而從實驗結果得到的資料可知，經過45℃處理的綠豆根尖的電導率的確比經25℃處理的根尖電導率高出很多，可知高溫對綠豆根尖的影響比較大。
整個過程中，由於溫度對溶液的電導影響很大，故必須在相同溫度下測定；葉片接觸的用具必須絕對潔淨（全部器皿要洗淨），不要用手直接接觸葉片，以免汙染；水浴加熱隔幾分鐘搖一次，測量前也要搖勻；煮沸時單管要分開，防止沸水竄入試管；每次往待測液中插入電極時，都要首先用超純水沖洗電極，並輕輕拭乾。
2、愈創木酚法測定過氧化物酶活性
pod 在植物中以兩種形式存在，游離態(可溶pod) 存在於細胞液中，結合態存在於細胞壁、細胞膜和細胞器上。在高溫處理的過程中，植物的細胞結構會遭到破壞，細胞壁的斷裂以及細胞膜和細胞器的破壞會使結合在上面的pod 釋放出來,轉化為游離的pod。
正常情況下pod的活性應該是25℃的高於45℃，因為酶的活性受溫度的影響，在一定的溫度範圍內，酶的活性隨著時間的增大而增大，但並不是溫度越高其活性就越大，高溫會破壞酶的結構。
根據折線圖的比較，可以看出實驗結果與**結果相符，25℃的pod高於45℃，但是與綠豆葉子比較，可以看出25℃的與45℃的處理後的結果比較接近，幾乎沒有差異，原因可能是：處理的時間過短且實驗次數過少，無代表性，要通過設計重複實驗提高實驗的正確性；短時間內，溫度處理對pod酶活性的影響不大。
酶液的的提取過程要盡量在低溫溫條件下進行，保證活性，以免影響實驗結果。
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