藥物對離體豚鼠迴腸的作用
【摘要】目的：了解膽鹼能神經遞質乙醯膽鹼（acetylcholine，ach）和區域性炎症介質組胺（histamine）對腸道平滑肌m膽鹼受體和h1受體的激動作用，以及它們的受體拮抗劑阿托品（atropine）和撲爾敏（chlorpheniramine）的阻斷作用。方法：
取離體豚鼠迴腸1cm，利用rm6240系統和張力換能器，分別檢測乙醯膽鹼，組胺，阿托品，撲爾敏和bacl2作用前後，迴腸平滑肌張力的變化。結果：乙醯膽鹼和組胺能使離體豚鼠迴腸平滑肌的收縮幅度增高,用阿托品處理標本後，乙醯膽鹼的收縮平滑肌效應被阻斷（p<0.
01）；用撲爾敏處理標本後，組胺的收縮平滑肌效應被阻斷（p<0.01）；bacl2能使離體豚鼠迴腸平滑肌大幅度收縮，再用阿托品處理標本，bacl2的收縮平滑肌效應被部分阻斷。結論：
乙醯膽鹼為m膽鹼受體激動藥，組胺為h1受體激動藥，bacl2為肌肉興奮劑，三者分別作用與迴腸平滑肌時，使平滑肌收縮。阿托品為m膽鹼受體阻斷藥，撲爾敏為h1受體阻斷藥，兩者可以分別阻斷乙醯膽鹼和組胺對平滑肌的激動作用。
【關鍵詞】乙醯膽鹼組胺阿托品撲爾敏 m膽鹼受體 h1受體
胃腸道平滑肌以膽鹼能神經佔優勢，小劑量或低濃度的ach即能激動m膽鹼受體，產生與興奮膽鹼能神經節後纖維相似的作用，興奮胃腸道平滑肌。atropine與膽鹼受體結合而本身不產生或較少產生擬膽鹼作用，卻能阻斷膽鹼能遞質或擬膽鹼藥物與受體的結合，從而產生抗膽鹼作用。histamine對多種動物的胃腸道和氣道平滑肌h1受體有興奮作用，豚鼠尤其敏感。
chlorpheniramine為h1受體拮抗劑，能阻斷histamine與h1受體的結合，從而產生抗histamine作用。bacl2為肌肉興奮劑，能夠使平滑肌強烈收縮[1]。
1.材料和方法
1.1 實驗動物豚鼠1只（雄性，健康）
1.2 儀器離體裝置，麥氏浴槽（25ml），hss－1（b）超級恆溫器(成都儀器廠)，張力換能器，rm6240bd型生物訊號採集處理系統（成都儀器廠），移液器20～200μl,100～1000μl各一把（finnipipette）,手術器械一套。
1.3 藥品和試劑臺氏溶液，10-2g/l氯化乙醯膽鹼溶液，1g/l硫酸阿托品溶液，10-2g/l磷酸組織胺溶液，10-3g/l撲爾敏溶液，10g/l bacl2溶液。
1.4 實驗方法
1.4.1 實驗裝置準備向麥氏浴槽中加固定量的臺氏液，調節超級恆溫器的溫度，使麥氏浴槽內溫度穩定在37±0.
5℃。通氣管接95%o2＋5%co2混合氣體管道。用螺絲夾調節氣體管道的氣體流量，調節至浴槽中氣泡乙個個逸出為止。
張力換能器固定於鐵支柱上，換能器輸出線接微機生物訊號處理系統。
1.4.2 儀器引數設定通道時間常數為直流，濾波頻率10hz，靈敏度3g，取樣頻率200hz,掃瞄速度1s/div（已設定）。
1.4.3 標本的製備取豚鼠乙隻，先用木槌擊其頭部致昏死，股動脈放血，立即剖開腹腔，找到迴盲部，然後在離回盲部1cm處剪斷，取出迴腸約10cm，置於氧飽和的臺氏液培養皿中，沿腸壁除去腸繫膜，然後將迴腸剪成數小段（約1～1.
5cm），用注射器吸取臺氏液將腸內容物沖洗乾淨，換以新鮮臺氏液備用。注意操作時勿牽拉腸段以免影響收縮功能。
取一小段腸管置於盛有臺氏液的培養皿中，在其兩端對角壁處分別用縫針穿線，並打結。注意保持腸管通暢，勿使其封閉。腸管一端連線繫於浴槽固定鉤上，然後放入37℃麥氏浴槽中。
再將腸管的另一端繫在張力換能器的懸臂梁上，將rm6240歸零，調節肌張力至約1g。
1.4.4 實驗處理待離體迴腸穩定15min後，記錄一段正常收縮曲線，加入10-2g/l ach 0.
2ml，觀察並記錄收縮曲線，2～3min後換液。注意每次浴槽的量應相等。重複以上ach劑量，穩定15min，待收縮達最高點時，加入1g/l atropine 0.
2ml,觀察並記錄其收縮曲線。不換液，待曲線基本穩定後，再加入相同濃度的ach，觀察並記錄其收縮曲線。
換液，加入10-2 g/l histamine 溶液0.3ml，待作用明顯時迅速換液，使腸肌張力恢復正常。加入10-3g/l chlorpheniramine 溶液0.
2ml,5min後（不換液）加入同量histamine，觀察並記錄其收縮曲線。
加入10g/l bacl2溶液1ml，觀察其反應，當作用達最高點，加入1g/l atropine 溶液0.2ml，觀察並記錄其收縮曲線。
1.5 資料記錄記錄在ach和阿托品＋ach，his和撲爾敏＋his的作用下，離體豚鼠迴腸平滑肌的收縮強度共4組資料。比較阿托品加入前後和撲爾敏加入前後兩種情況下平滑肌收縮強度的變化。
1.6 統計處理實驗結果用±s表示，用microsoft excel 軟體處理，兩組間比較採用t檢驗，p<0.05認為有顯著性差異。
2.實驗結果
用rm6240bd型生物訊號採集處理系統記錄和測量各種試劑作用前後平滑肌張力變化。實驗的張力變化趨勢見附圖1，各試劑作用前後張力變化幅度資料如表1所示。
表1.藥物對離體豚鼠迴腸的作用
ach收縮幅度（ghistamine收縮幅度(g)
樣本號ach ach+atropinehistamine 撲爾敏+ histamine
13.05 0.1173.58 0.344
22.81 0.1032.23 0.564
33.43 0.1253.07 0.111
43.26 0.1873.46 0.394
51.34 0.2712.16 0.776
62.15 0.1202.98 0.230
73.340.083.010.418
83.46 0.1542.59 0.103
92.88 0.0801.75 0.390
±s 2.86±0.701 0.120±0.09382.76±0.618 0.37±0.213**
注：*p=4.47349e-06<0.01 **p=9.82568e-06<0.01
由以上資料以及處理結果可知，ach能夠使平滑肌強烈收縮，收縮幅度為2.86±0.701，而經阿托品作用後其收縮幅度成0.
120±0.0938，兩者用t檢驗可得p<0.01,兩者有顯著差異，說明阿托品能夠阻斷m膽鹼能受體，具有對抗ach的作用。
如上histamine同樣具有使迴腸平滑肌收縮的能力，作用前後其張力變化幅度為2.76±0.618，經撲爾敏作用後，再加入histamine平滑肌的收縮幅度變為0.
37±0.213，用t檢驗得p<0.01，兩者差異顯著。
說明撲爾敏具有對抗histamine的作用，主要是阻斷了腸道上的h1受體。
由附件1的趨勢圖可知，bacl2能使平滑肌劇烈收縮，阿托品則只能部分阻斷其收縮作用。
3.討論
3.1 m受體激動藥及拮抗藥對平滑肌的藥理作用
m膽鹼受體激動藥可分為兩類，即膽鹼酯類和天然形成的擬膽鹼生物鹼。乙醯膽鹼屬於膽鹼酯類藥物[2]，小劑量時為m膽鹼受體激動作用。ach與m膽鹼能受體結合，使平滑肌ca2+通道開放，ca2+內流增加，肌漿ca2+濃度增大，平滑肌收縮幅度增高。
大劑量時也有n膽鹼受體激動作用，使胃腸道平滑肌興奮。atropine為m膽鹼受體阻斷藥，其與平滑肌細胞膜m-受體結合，本身不產生或較少產生擬膽鹼作用，卻能阻斷乙醯膽鹼與m-受體結合，阻斷乙醯膽鹼與m-受體的激動作用[3]。
3.2 h1受體激動藥及拮抗藥對平滑肌的藥理作用
組胺是一種血管活性胺。與平滑肌細胞膜h1受體結合，通過啟用g蛋白-磷酸脂酶c系統，使細胞內ca2+增高，平滑肌收縮。撲爾敏為h1受體阻斷藥，與平滑肌細胞膜h1受體結合，從而阻斷組胺對h1受體的激動作用。
3.3氯化鋇引起迴腸平滑肌收縮機制
氯化鋇為肌肉興奮劑，可通過兩種機制使平滑肌收縮。一是ba2+經鈣通道進入胞漿，使肌漿ca2+濃度提高，平滑肌收縮幅度增高；二是氯化鋇能興奮膽鹼能n受體，n受體有神經型和肌肉型，n受體激動時改變na+、k+、ca2+通道的電生理學特性，使肌肉收縮[4]。
用大劑量阿托品處理標本後，阿托品對n型受體有阻斷作用，產生抗氯化鋇作用。但由於阿托品無法阻斷氯化鋇興奮肌肉的離子效應，所以在附圖1上表現出收縮幅度部分下降的現象。
3.4非特異性的腸道平滑肌抑制藥對ach作用的影響
非特異性腸道平滑肌抑制藥可拮抗平滑肌的收縮效應，但其受體選擇性較低，作用的受體型別多，具有廣譜性，因此相對於ach等選擇性較高的藥物來說，其藥效不佳。所以，非特異性腸道平滑肌抑制藥還是具有一定的對抗ach的腸道平滑肌收縮作用[4]。
3.5西咪替丁（cimetiding）的藥理作用
西咪替丁是h2受體阻斷藥，通過阻斷壁細胞上的h2受體，抑制基礎胃酸和夜間胃酸分泌，對胃泌素及m受體激動藥引起的胃酸分泌也有抑制作用[5]。而組胺為h1受體激動藥，其選擇性作用於h1受體，所以西咪替丁不能阻斷組胺對腸道平滑肌的興奮作用。
1. 陸源,夏強. 生理科學實驗教程. 杭州：浙江大學出版社,2004：245－247.
2. 陳季強.基礎醫學各論（下冊）.北京：科學出版社，2004：267.
3. 楊世傑. 藥理學. 北京：人民衛生出版社,2005:63－64,80－82,163－166.
4. 姚泰. 生理學. 北京：人民衛生版社,2005：285－289.
藥物SRB法實驗步驟
取12個ep管，每個加入 200ul 5 的應用液，按上述 加入對應的藥物和dmso 接種細胞 細胞傳代至對數生長期後，經胰酶 edta液消化，調終濃度為5 10 4 ml，接種於96孔板中，每孔200 l。邊緣孔用無菌pbs填充 5 co2，37 孵育。培養細胞 24h後 至細胞單層鋪滿孔底 96...
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