藥物SRB法實驗步驟

2023-02-15 02:21:04 字數 727 閱讀 9421

取12個ep管,每個加入(200ul*5)的應用液,按上述**加入對應的藥物和dmso

⒉ 接種細胞

細胞傳代至對數生長期後,經胰酶-edta液消化,調終濃度為5×10 4 /ml,接種於96孔板中,每孔200μl。,(邊緣孔用無菌pbs填充),5%co2,37℃孵育。

⒊ 培養細胞

24h後(至細胞單層鋪滿孔底(96孔平底板)),棄去板上各孔內原有液體,再分別換上含有相應濃度藥物的細胞培養液,於37℃,5%co 2 培養箱中培養;各種藥物每濃度設5個平行孔。

⒉ srb用1%醋酸配成0.4%溶液。細胞在加藥培養結束(48h)後用三氯醋酸(tca)固定:

貼壁細胞每個小孔加預冷的50%tca液50ul(終濃度為10%)固定;加tca時必須輕輕加在培養液表面,先靜置5 min然後再將平板移至4℃放置1 h,這樣細胞固定在培養孔的底部。

⒊ 倒掉固定液,小孔用滅菌三蒸水洗5遍,甩乾,空氣乾燥。

⒋ 每孔加入0.4% srb溶液100μl,避光,在室溫放置10 min。未與蛋白結合的srb用1% tca液洗5遍,空氣乾燥。

⒌ 結合的srb用150ul 10 mmol/l非緩衝tris鹼液(ph10.5)溶解,放在微量振盪器上5 min,避光。

⒍ 在酶聯免疫檢測儀測定od值,用空白對照調零,在波長為490 nm處測定每個小孔的od值。將所獲腫瘤細胞生長抑制率定義為藥物對腫瘤細胞的體外抑制率。

抑制率=(無藥細胞對照孔od值-用藥孔od值)/無藥細胞對照孔od值×100%

崗位排序法操作步驟

1 崗位分析。由有關人員組成評價小組 最好有企業領導幹部 主管部門領導 勞動人事幹部和職工代表參加 並做好相應的各項準備工作。同時對工作崗位情況進行全面調查,收集有關崗位方面的資料 資料,並寫出調查報告,其中要特別說明基本的工作要素 任務 責任 與其他工作崗位的聯絡 工作條件 技能和能力要求等。2 ...

酶解實驗步驟

第四節 凝膠蛋白質點的酶解 一.蛋白質點酶解 準備工作 1 檢查凍乾機,調好水浴鍋 37 56 2 檢查各種試劑的量是否足夠 dtt iaa nh4hco3 3 檢查酶解房衛生狀況 每一步注意事項 1 每一步加入的液體量視膠塊大小定,一般是50ul 管 2.每次 後隨手甩一下,以便把膠塊和管壁上的液...

實驗操作步驟整理

1.切片常規脫蠟至水化 燒片80oc,1h 松節油i 20min,ii 15min 100 乙醇i 8min,ii 5min 95 乙醇i 5min,ii 5min 75 乙醇 i 5min,ii 5min 蒸餾水 5 min x3 pbs 5min x1.2.失活內源性過氧化物酶 3 h2o2 3...